中药材蛇胆DNA分子标记鉴定的研究.pdfVIP

( ) 药学学报 Acta Pharmaceutica Sinica 2001 ,36 3 :229 - 232 2·29 · 中药材蛇胆的DNA 分子标记鉴定研究 3 刘向华 , 王义权 , 刘忠权 , 童宗中 , 周开亚 (南京师范大学遗传资源研究所 ,江苏 南京 210097) 摘要 : 目的 　运用分子标记技术鉴定药材蛇胆的真伪 , 以克服目前仅依据形态、显微特征及理化性状进行鉴别 的不足。方法 　分别从药材蛇胆的胆衣和胆汁、原动物棕黑锦蛇的肌肉和胆汁中提取 DNA ,经 PCR 扩增得到约 400 bp 的 12S rRNA 基因片段 ,并对该基因片段进行测序研究。结果 　从少量药材蛇胆的胆衣和胆汁中可提得足够用于 PCR 扩增的 DNA 模板 ,扩增产物的测序结果表明同一动物的胆衣和胆汁、肌肉和胆汁的碱基序列完全一致。结论 DNA 分子标记技术可用于中药材蛇胆和胆汁的鉴定 ,提示该技术也可用于其他动物分泌物类型药材的鉴别。目前 市场上药材蛇胆来源较复杂 ,需加强质量监督和控制。 关键词 : 蛇胆 ; 胆衣 ; 胆汁 ; PCR 扩增 ; DNA 测序 ( ) 中图分类号: R286. 0 ; R282. 5 　　　文献标识码 : A 　　　文章编号 : 0513 - 4870 2001 03 - 0229 - 04 　　蛇胆为传统中药 ,有祛风、清热、化痰、明目等功 蛇胆和白酒浸泡蛇胆的胆衣和胆汁中分别提取 效。近年来市场上伪品蛇胆时有出现 ,常见伪品有 DNA 、PCR 扩增和 DNA 测序 ,并就动物胆汁等分泌 鳖、青蛙、鱼和多种家禽等小动物的胆 ,影响了临床 物药材是否可用 DNA 分子标记加以鉴定进行讨 疗效和用药安全[1 ] 。杨育民等[2 ] 曾对蛇及一些小 论。 动物胆进行外观形态和显微特征的对照鉴别 ,该方 法虽简单易行 ,但受主观影响较大 ,并且胆的形态学 材 料 与 方 法 特征因加工的方法和条件不同 ,及取胆时动物的生 理状态差异而变化。根据蛇胆所含成分的特点 ,一 1 　材料 　药材蛇胆分别购于江苏南京、苏州、福建 些常用的理化鉴别方法 ,如糠醛 硫酸法、薄层色 福州的市场。实验中以家鸭 A nas plat yrhynchos ( ) 谱和紫外光谱等也用于真伪蛇胆及其制剂的鉴 domestica 的胆 南京菜市场 和乌梢蛇 Zaocys 别[3 - 5 ] 。但是蛇胆的薄层色谱鉴别容易造成误 dhum nades 的冻存肌肉组织作为DNA 提取、扩增对 差[6 ] ;不同动物胆汁间的紫外光谱有一定程度的相 照 ,并分别选取 1 枚干蛇胆和 1 枚白酒浸泡蛇胆的 似性 ,有时难以找出具有特征性的吸收峰波长[7 ] 。 胆衣和胆汁及棕黑锦蛇 Elaphe schrenckii 的冻存肌 因此 ,有必要寻找更准确的蛇胆真伪鉴别方法。 肉和