RNA干涉及其在植物功能基因组学的研究中的应用.pdfVIP

植物生理学通讯 第41卷 第2期，2005年4月 215 信息与资料 Imformation and Data RNA干涉及其在植物功能基因组学研究中的应用 杨坤 王琦 李艳红* 首都师范大学生命科学学院，北京100037 RNA Interference and Its Application in Researches of Plant Functional Genomics * YANG Kun, WANG Qi, LI Yan-Hong College of L ife Science, Capital Normal University, Beijing 100037 提要 介绍了RNA干涉(RNA interference)过程中所涉及到的一些关键因子以及其在植物基因功能和抗病毒研究中的最新 研究进展。 关键词 RNA干涉；双链RNA；植物基因功能 [1] 小RNA互补，则双链小RNA与mRNA序列发生 1998年，Fire等 首次在秀丽新小杆线虫 (Caenorhabditi elegans)中发现，将体外转录得到 链交换，结合在蛋白质复合物上的RNase III将与 的单链RNA经纯化后注射入线虫，基因抑制效应 小RNA反义链配对的mRNA切断，最终导致RNA 即变得十分微弱，而经过纯化的双链RNA则能高 干涉的发生。这些说明双链RNA在整个RNAi发 效特异性地阻断相应基因的表达，这一现象称为 生过程中的作用非常重要。 RNA干涉(RNA interference，RNAi)。在随后的 1.2小的干涉 siRNA) 2年内，人们相继发现RNA干涉现象广泛存在于 　不同情况siRNAs诱导RNAi的效率不同，最有 植物、真菌、线虫、昆虫、蛙类、鸟类、大 效的siRNA是21个碱基大小，3端有两个碱基突 鼠、小鼠、猴等几乎所有的真核生物中[2] 。迄 出的双链RNA，它能使靶RNA和蛋白水平降低 今，RNAi发生机制的研究已取得了一定的进展， 90%以上。siRNA对靶序列专一性要求非常严 现对这一现象的研究概况作一些介绍。 格，与靶mRNA之间的1个碱基错配都会显著削 1 RNAi涉及的因子 弱基因沉默的效果。 1.1双链RNA(double-stranded RNA, dsRNA)在 修饰或错配的核糖核酸多集中在5内部位置 RNAi过程中，dsRNA起了至关重要的作用。 或距siRNA双链3端一半的位置。研究表明，5 dsRNA可因RNA病毒的入侵、转座子转录、基 端的完整性相对于siRNA距3一半的位置对RNAi 因组中反向重复序列转录而产生。它既可以是分 的发生更加重要[3,4] 。这也说明siRNA结构的不对 开的2个RNA分子互补形成分子间双链，也可以 称性是诱发RNAi发生所必需的，5端的完整性对 是一个RNA分子回折，自身互补，形成分子内 于RNAi的发生是不可缺少的，但它也会因3端 双链。RNAi的触发依赖于dsRNA的产生，然后 的修饰而有所减弱。 dsRNA与细胞中的特定蛋白质复合物结合，启动 有人用体外培养的哺乳动物细胞研究发现， 相关蛋白质结合到dsRNA分子上，再在依赖于 siRNA的两条链在诱导产生RNAi过程中的作用不 RNA的RNA聚合酶的作用下，引发dsRNA分子 [5] 同 。发生在其反义链的唯一的1个碱基错配就会 的扩增效应，产生更多的dsRNA。同时，RNase III 导致RNAi的明显降低，而如果正义链上出现这 特异地识别dsRNA，将其降解成21~25 nt双链小 RNA。这些带有21~25 nt双链小RNA的蛋白复合