中介素对大鼠肾小管上皮细胞缺氧复氧模型cAMPPKA途径影响.pdfVIP

±堡塑堡丛登苤：茭!!!!至i旦筮丝鲞箜!塑曼!!!』旦!!!：丛!竺!!!!!!y竺!：丝：∑竺：i ·论著摘要· 中介素对大鼠肾小管上皮细胞缺氧／复氧模型 cAMP／PKA途径的影响 周芸 李荣山 乔唏 崔晓燕 刘兴花 白波 邵珊 中介素(Intermdin。IMD)是降钙索H／R前培养基中加入8-Br-AMP，终浓I。DH含量明显增加(PO．05)，模型各 基因相关肽(CGRP)超家族新成员．在度20 组I’甘jLDtI比较差异无统计学意义。复 vmol／I。)、DPI组(正常细胞．H／R 肾脏晕高表达，口r增加肾|0L流和尿量，降前培养基中加入DPI，终浓度lO 氧后模型各组I。DH含量进一步七升， 低肾血管阻力“；能通过环磷酸腺苷 与对照组相比，P0．01；IMD质粒组与 Ixmol／l，)共7组。H／R模型建立：将模 min (cAMP)／蛋白激酶A(PKA)途径减少型组各组细胞中加入已预充氮气30 8一Br—cAMP组I．DH上升幅度较小，与 活性氧族(reactiveoxygen 的无氧液各2ml。缺氧培养1h；复氧培 H／R组相比。PO．05。 species．ROS) 的含量减轻心脏缺血再灌注(Isehcmia养1．5h。收集细胞及培养液上清。比色 H／R后各组细胞培养液上清 法分别检测缺氧前后和复氧后培养上清 reperfusion，I／R)损伤口。。我们以火鼠 近端肾小管上皮细胞NRK一52E缺氧复液I。DH含量，复氧后细胞NADPH氧化酶、MDA与ROS含最比较地表2。 氧(hypoxiareoxygenation，H／R)模型模化酶活性，MDA、R()s及SOD；ELlSA与对照组相比。各模型组在H／R后培养 拟在体I／R，研究IMD对此模型cAMP／法检测复氧后培养E清液cAMP。采用液卜清cAMP含量均明显增加(P SPSS PKA途径的影响，为揭示IMD保护肾 13．0软件包处理数据。数据均以0．01)。与H／R组比较。lMD质粒组、 脏l／R损伤机制提供实验依据。 孑士s表示。组间比较采用f检验或单囚 H 材料与方法 NRK-52E由中…大素方差分析。P0．05为差异有统计学 学第一医院余学清教授惠赠；稳定转染 意义。 0．01)和58．27％(P0．01)，『『IiDPI组 plRES2一EGFP(即夺质粒)和plRES2一结果 各组细胞培养液上清巾 降低J，31．06％(P0．05)。与对照组 EGFP／IMD(即IMD质粒)细胞株由本LDH含量的变化，见表1。与对照组相相比，lMD质粒组、H-89组和DPI组 实验室制备。DMEM／F12培养基(美国 比，各模型组缺氧1h后培养液上清 Gibco公司)。乳酸脱氢酶(LDH)试剂盒 表1 各组细胞培养液卜清I．DH含量比较(牙士s) (南京建成)，cAMPEl。ISA检测试剂盒 (美国ADL公司)，细胞丙■隘(MDA)、 ROS、NADPI-I氧化酶、SOD检测试剂盒 (上海杰美医药)。DPI，8-Br-cAMP(美 国Sigma公司)，H89(江苏碧云天)。 NRK一52E细胞株于含10％胎牛血清 DMEM-F12培养基，37℃，5％C02孵 箱培养。随机分为对照组(常规培养)， H／R组(正常细胞)、空质粒组(空质粒 注：“一”为朱查 细胞株)、lMD质粒组(IMD质粒细胞 株)、H-89组(1MD质粒细胞株，H／R前 培养基中加入H一89，终浓度lo 表2各组细胞培养液上清cAMP含量及各组细胞S