促卵泡素对奶牛卵母细胞体外成熟影响.pdfVIP

第 30卷 第 5期 家畜生态学报 Vo1．30NO。5 2009年 9月 ActaEcologiaeAnimalisDomastici Sept．2009 促卵泡素对奶牛卵母细胞体外成熟的影响 马 红 (黑龙江省农业科学院，黑龙江 哈尔滨 150086) [摘 要] 为研究促卵泡素 (FSH)在奶牛卵母细胞的成熟过程 中的促进作用 ，在牛卵母细胞 成熟液中添加 0~／g／mL、10btg／mL、25x／g／mL、50~／g／mL、100~g／mLFSH 统计成熟率 。结 果表明，添加 FSH各组与对照组相比，卵母细胞的成熟率均显著提高。而添加 10txg／mL、25 ／lg／mL、100~／g／mL组卵母细胞的成熟率之间差异不显著 ，50~／g／mL组卵母细胞的成熟率最 高。无论是否添加 FSH都不会影响到孤雌激活的卵裂率。说 明FSH具有促进奶牛卵母细胞 成熟 的功能。 [关键词] 奶牛；促 卵泡素；卵母细胞；体外成熟 [中图分类号] s8l1．5 [文献标识码] A [文章编号] 1004—5228(2009)05—0029—02 随着动物克隆技术和胚胎工程技术 的发展，对 FBS；成熟液 (2)：M199+FSH(10Fg／mL)；成熟液 体外生产胚胎的数量和质量的要求越来越高 ，因此 (3)：M199+ FSH(25z／g／mL)；成熟液 (4)：M199+ 提高卵母细胞的体外成熟率和成熟质量显得越来越 FSH (50 “g／mL)；成 熟 液 (5)：M199+ FSH 重要 。许多试验表明体外受精胚胎前期的代谢活动 (100~g／mL)。 主要是 由母源性基 因及其产物所调控 。因此 ，卵母 1．2．2 收集可用于成熟培养的卵丘一卵母细胞复合 细胞体外成熟情况是决定卵裂率及其囊胚发育率高 体 (CumulusOocyteComplexes，COCs) 将收集的 低的关键 [1]。一般认为体内卵母细胞成熟是通过促 COCs分别用 5种不同的成熟液清洗三遍，然后置 性腺激素来调节的，研究各种激素对卵母细胞体外 于含成熟培养液 的 35mm培养皿 中，在38．5℃、 成熟的影响就成为研究的重点 内容L2]。本研究通 5 CO 和饱和湿度的 CO。培养箱中培养。 过在成熟液中添加不同浓度的促 卵泡素 (FSH)，探 1．3 成熟卵的检查 讨其对奶牛卵母细胞成熟以及孤雌激活后卵裂率的 将成熟培养后 22h的 COCs置于含 0．2 透 明 影响。 质酸酶和 5 FBS的H—M 199中，用 100 L的微 量移液器反复吹吸，去掉成熟卵母细胞表面的卵丘 1 材料及方法 细胞，用含 5％ FBS的H—M 199洗涤三次 ，以排 出 1．1 卵巢卵母细胞的采集 第一极体为成熟标准 ，然后于显微镜下检查成熟率。 将采集的卵巢置于 30℃含硫酸庆大霉素的灭 1．4 卵母细胞的孤雌激活及发育培养 菌生理盐水 的保温瓶 中，3h内运 回实验室 。用预 选择成熟卵母细胞 ，放人含 5mM 离子霉素 的 温的生理盐水清洗卵巢 ，用 1OmL注射器吸取卵巢 H—M199中激活 5min，然后在含 2mM 6-DMAP的 表面 2～5mm 大小的卵泡，卵泡液收集于 60mm H—SOF培养液中