实时聚合酶链反应熔解曲线法快速检测耐多药结核分枝杆菌.pdfVIP

·888· ．论著． 实时聚合酶链反应熔解曲线法快速检测 耐多药结核分枝杆菌 王峰崔运勇 胡思玉桂静杨慧 李庆阁 刘小立 【摘要】 目的应用实时PCR熔解曲线法快速检测MTB对利福平和异烟肼的耐药性，并与比 例法检测结果进行比较。方法收集深圳市2007--2009年耐药监测项目、全国耐药基线调查项目和 深圳市慢性病防治中一6f-I诊患者临床分离株311株，采用实时PCR熔解曲线法检测rpoB基因耐药突 94和katG 变热点区、ahpC启动子区(半一-30及-15～-3位点)、inhA启动子区(一17—-8位点)、inhA 315位耐药突变，并与耐药基因测序及表型药敏试验结果进行比较。以比例法药敏试验结果作为 MTB药敏试验的金标准，评价实时PCR熔解曲线法的敏感度、特异度与金标准的符合率。结果实 时PCR熔解曲线法2～3h即可完成检测，扩增和结果判定在1个反应管内完成。检测利福平耐药的 敏感度为97．8％，特异度为97．1％，准确性为97．4％；检测异烟肼耐药的敏感度为86．6％，特异度为 98．7％，准确性为92．6％。对耐多药MTB的检测敏感度为88．6％，特异度为100．0％，重复性为 100．0％。结论实时PCR熔解曲线法检测MTB对利福平和异烟肼耐药性，与比例法检测结果比较 具有很好的一致性，且具有快速、准确的优点，有较好的临床应用价值。 【关键词】分枝杆菌，结核；抗药性，多药；利福平；异烟肼；突变；聚合酶链反应 detectionof isoniazid-resistanttuberculosisreal-timePCR Rapid rifampin-and Mycobacteriumusing and curve WANG meltinganalysis Jing。YANGHui，uQing一 Fe愕’，CUlYun-yong，HUSt—yu．GUI Xiao一坛 CenterChronicDisease 舻，Ⅱu $DepartmentofPathogenicLaboratory，Shenzhenfor Control， Shenzhen518D20．China author：UU CenterChronic Corresponding Xiao-li，DepartmentofPathogenicLaboratory。Shenzhenfor Disease Control，Shenzhen518020，China，Email：liuxl36@126．corn Toevaluatethe ofareal-timePCRand curve 【Abstract】0bjectiveapplication meltinganalysis in for detectionof andisoniazidresistance tuberculosis(Mtuberculosis)． assayrapid rifampin Mycobacterium MethotisAtotalof311clinicalisolatesof舱tuberculosisobtainedfromShenzhenCenterforChronic Disease includedinthe isolateswerecollected fromnational Control(SZCCC)were study．These originally baseline on