miRNA-17—92基因簇对大肠癌HT29细胞周期调控机制研究.pdfVIP

2014年 1月第31卷第 1期 广州中医药大学学报 January2014，Vo1．31，No．1 Journal ofGuangzhouUniversityofTraditionalChineseMedicine 113 ． 基础研究 ． miRNA一17—92基因簇对大肠癌HT29细胞周期调控机制研究 常金荣 ， 桂蜀华 ， 邓汝东3 王建华 ， 杜群 (1．广州中医药大学基础医学院中医基础公共实验室，广东广州 510006： 2．广州中医药大学中药学院方剂教研室．广东广州 510006： 3．广州中医药大学基础医学院解剖教研室，广东广州 510006；4．广州中医药大学脾胃研究所 ，广东广州 510405) 摘要： 【目的】探讨miRNA (miR)一17-92基因簇对大肠癌HT29细胞周期的调控机制，为大肠癌临床诊断和治疗提供潜在靶点 【方法】体外培养人结肠癌HT29细胞，转染miR一17—5p和miR一20a后，采用实时荧光定量PCR验证转染效果，采用四甲基 偶氮唑盐 (MTT)法检测转染后细胞增殖情况，流式细胞术检测细胞周期分布情况，Westem印记法检测E2F1蛋白表达水平 【结 果】miR一17—5p和miR一20a分别以50、100nmol／L浓度转染24h后的HT29细胞用于后续实验；两者均可促进HT29细胞的 增殖，具有时间依赖性 ；能够将细胞阻滞在 s期，抑制靶基因E2F1蛋白的表达水平。 【结论】miR一17—92基 因簇通过抑制 E2F1的翻译促进大肠癌细胞的增殖．提示miR一17—92基 因簇在大肠癌细胞周期调控中可能发挥癌基因的作用 关键词：大肠癌：细胞增殖；细胞周期；细胞培养：蛋白表达 中图分类号：R735．3 文献标志码：A 文章编号：1007—3213 (2014)01—0l13—05 大肠癌是世界上发病率和病死率最高的恶性肿 miR一92—1)组成 由于它与多种实体瘤的发生密 瘤之一。它的发生是多阶段 、多步骤的病变过程 。 切相关而受到广泛关注 其中miR一17—5p、miR一 原癌基因和肿瘤抑制基因的传统遗传学和表观遗传 2Oa能够调控细胞周期转录因子 E2F1的表达．同 学的改变是其基本的致病机制E1] 近年来对非编码 时E2FI和miR一17—92转录又可以被癌基因mvc诱 基因组序列的研究揭示微小 RNA (miRNA)在肿 导．构成了一个复杂的相互调控网络．参与了肿瘤 瘤的发病机制中发挥着新的重要作用 [。 发生发展过程 [ 中医药防治肿瘤的优势越来越受 miRNA是一类长度在 22个核苷酸左右的内源性 到广大患者的认同 近年来．本课题组对左金丸防 非编码小分子RNA．主要通过与靶标基因3’UTR的 治大肠癌作用机理进行了大量的研究．分别从端粒 完全或不完全配对 ．降解靶标基因mRNA或抑制 酶、APC基因突变以及肠隐窝形态学方面探讨左 其翻译，从而参与调控个体发育，细胞增殖、凋亡 金丸对大肠癌有不同程度的干预作用 ．延缓癌症 及分化等生命活动 近年随着肿瘤研究的深入 ． 进程 [s] 本研 究通过转染结肠癌 HT29细胞 miRNA已经成为肿瘤生物治疗领域的一个新亮点． miR一17—5p、miR一20a。检测转染后 E2F1蛋 白表 越来越引起研究人员的关注 目前。人类已经发现 达水平的变化 ．探讨 miR一17—92对大肠癌细胞周 400余种 miRNA．可以调控人体中1／3基因的表达 期的调控机制．为大肠癌的临床诊断及中医药防治 水平 [ 如果相关的miRNA发生突变，激活相关 提供实验依据 ．现报道如下 癌基因的表达或引发抑癌基因的缺失．就会导致肿 瘤的发生 已有工作人员利用小鼠模型和培养的肿 1材料和方法 瘤细胞对 miRNA在肿瘤发生发展中的功能进行研 1．1 细胞株 人结肠癌细胞株 HT29．由上海生 究 ．结果表明miRNA是肿瘤发生发展过程中的重