甘蔗UGPase+5’侧翼序列克隆及缺失表达分析.pdfVIP

植物研究 2014，34(1)：62～67 BulletinofBotanicalResearch 甘蔗 UGPase5侧翼序列克隆及缺失表达分析 叶冰莹 ， 王 婷 ， 何文锦 邱 思 ， 陈由强 (1．福建师范大学生命科学学院，福州 350108；2．农业部福建甘蔗生物学与遗传育种重点实验室，福州 350108；3．发育与神经生物学福 建省高等学校重点实验室，福州 350108) 摘 要 以甘蔗(FN95；一1702)为材料，通过接头连接PCR方法克隆该基因不同长度 5侧翼序列。将不同长度的 5侧翼序列连同UGPase基因的外显子片段定向插入到GUS基因上游，在保证其后 GUS编码框不发生偏移的情况 下，插入的UGPase外显子融合 GUS表达成为新的报告基因。根据此策略，构建了一系列表达结构为5Flanking Sequence—UGPaseExon—GUSNospolyA的5侧翼序列缺失表达载体，进行启动子活性分析。注射法转染烟草叶片组 织检测GUS瞬时表达，分析结果表明，所克隆到的UGPase基因5端侧翼序列不具有启动子活性。 关键词 5侧翼序列 ；缺失表达；甘蔗；UGPase 中图分类号：S435．661 文献标志码 ：A doi：10．7525／j．issn．1673—5102．2014．o1．009 CloningandLossExpressionAnalysisof5 FlankingSequenceof UDP·glucosePyr0ph0sph0ryIasefrom Sugarcane YEBing．Ying，。 WANGTing，。 HEWen—Jin’ QIUSi，。 CHENYou．Qiang’。，。 (1．CollegeofLifeScience，FujianNormalUniversity，Fuzhou 350108；2．KeyLabofFujianSugarcaneBiologyandGeneticBreeding，MinistryofAg— ricuhure，Fuzhou 350108；3．StateKeyLaboratoryofDevelopmentalBiologyandNeurobiology，InstitutionforHigherLearninginFujian，Fuzhou 350108、 Abstract Thedifferentlengthsof5 flankingsequenceofUGPasewereclonedbyAdaptor—ligationPCR．These differentlengthsof5 flankingsequencesofUGPasegenewerefusedwiththecodingsequenceofGUS (一 glucuronidase)genetoconstructfusiongenes．AllthefusiongeneswereinjectedintoleavesofNicotiana tabacum fortransientGUSexpression．Theresultsshowedthatthe5 flankingsequenceofUGPasegenedidnot haveanypromoteractivity． Keywords 5 flankingsequences；lossexpression；Sugarcane；UGPase UGPase(UDP．glucosepyrophosphorylase，尿苷 起始子、上游元件、应答元件在 内的功能基因5端 二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶)是糖代谢过程中的关 上游较长的DNA序列。LA—PCR(接头连接 PCR) 键酶，对蔗糖积累和细胞壁形成有重要影响 ¨J。 技术利用 Cassette和CassettePrimer，特异性地扩增 基因的表达随着内外环境条件的变化而加 以调整， 结构基因5端上游的未知区域。本实验根据甘蔗 基因的表达调控可以在不同水平上进行，如转录水 UGPase基因5侧翼序列的结构特征和表达调控作 平调控、翻译水平调控及蛋 白质加工水平的调控 用元件的分布情况_4，构建不 同长度的启动子嵌 等 J。其中转录水平的调控是最主要的。位于 合 GUS基因的缺失表达载体。