正交试验优化黏质沙雷菌脂肪酶包涵体复性条件.pdfVIP

4 食品与药品 FoodandDrug 2010年第 l2卷第0l期 · 论 著 · 正交试验优化黏质沙雷菌脂肪酶包涵体复性条件 庞怀宇，吴娇娇，李素霞 ，许建和 ，赵 健，范立强 (华东理工大学生物反应器工程国家重点实验室，上海200237) 摘 要：目的 优化黏质沙雷菌脂肪酶复性条件。方法 采用正交试验研究影响脂肪酶复性的关键因素，包括复性液的离 子强度、pH、复性温度和复性液尿素浓度；进一步优化筛选出的关键因素。结果 最佳复性液组成为20mmol／LTris．HC1 (pH7．0)，1mmolL／ca2+，复性液中尿素浓度0．8molL／，复性温度3O℃。复性12h后脂肪酶活性可达3500UL／。结论 影响 脂肪酶复性的关键性因素为复性液pH及离子强度。ca2十可以促进脂肪酶复性。 关键词：脂肪酶；复性：正交试验；优化 中图分类号：Qs56 文献标识码：A 文章编号：1672-979X (2010)01-0004-03 OptimizationofRefoldingConditionsofSerratiamarcescensLipasefrom InclusionBodyby Orthogonalr】1est PANGHuai—yu，WUJiao-jiao，LISu—xia’，XUJian—he，ZHAOJian，FANLi-qiang (StateKeyLaboratoryofBioreactorEngineering,EastChinaUniversityofScienceandTechnology, Shanghai200237，China) Abstract：ObjectiveTooptimizetherefoldingconditionsofSerratiamarcescenslipasefrominclusionbody expressedbyEscherichiacoli．MethodsAno~hogonaltestwasdesignedinordertoscreenthekeyfactorsonlipase refolding，suchashteionstrength，pH，temperatureofrefoldingandtheconcenrtationofureaintherefoldingbuffer． Then，thefurtheroptimizationwasmadeonthekeyfactors．ResultsAfterrefoldingfor12h，theactivityoflipasewas upto3500U／Lundertheoptimumrefoldingconditionswith20mmol／LTris—HC1(pH7．O)，O．8mol／Lurea and 1mmol／LCa2intherefoldingbufferat30℃． Conclusion TheionstrengthandpH ofrefoldingbuffercanbe thekeyfactorsofrlipaserefolding．ThelipaserefoldingcanbepromotedwithhtepresenceofCa： ． KeyWords：lipase；refolding；o~hogonaltest：optimization 微生物脂肪酶 (1ipase，EC3．1．1．3)是一类能催化 消旋体得到合成地尔硫卓的关键手性前体(2R， 长链脂肪酸甘油酯水解为甘油和长链脂肪酸的酶类。 3s)一(一)一(4’一甲氧苯基)缩水甘油酸甲酯[(一)一MPGM]，具 主要用于食品加工、新型生物材料、生物医学等领 2]o 有很好的工业应用前景 3【】。 脂肪酶催化具有高底物专一性、对映选择性等特点， 黏质沙雷菌脂肪酶基因克隆到大肠杆菌后，其表 广泛用于催化合成手性化合物。黏质沙雷菌脂肪酶