信号转导和转录激活因子基因表达的抑制及其对HepG2细胞增殖的影响.pdfVIP

山西医药杂v±,g2010年 1月第 39卷第 1期上半 月 ShanxiMedJ，January2010，Vol39，No．1theFirst · l3 · 信号转导和转录激活因子基因表达的抑制 及其对 HepG2细胞增殖的影响 长治医学院附属和平 医院(046000) 段 满乐 郭金英 王亚飞 【摘 要】 目的 探讨应用 RNAi技术沉默信号转导和转录激活因子 (STAT3)基 因对肝癌 HepG 细胞 的 影 响。方法 针对 STAT3mRNA序列设计合成 3对编码小干扰 RNA(SiRNA)的DNA模板 ，构建 pGenesil一1一 shRNA—STAT3重组质粒 ，转染人肝癌细胞 HepG2细胞 。通过半定量反转录一聚合酶链反应 (RT—PCR)、Western blot检测 STAT3基因mRNA和蛋 白水平 的表达情况 ，采用 四甲基偶氮唑蓝 (MTT)实验检测转染后细胞增殖 的 变化 。结果 成功构建 了pGeneSil1shRNA—STAT3重组质粒 ，并转染 HepGz肝癌细胞 ；半定量 RT～PCR、 Westernblot结果显示 ，重组质粒转染组细胞 的STAT3基因表达在mRNA及蛋 白水平上显著低于对照组 ；MTT 实验结果显示 ，重组质粒转染组细胞的增殖 明显受到抑制 。结论 pGeneSil1．0-shRNA-STAT3转染 HepGz肝 癌细胞后 ，可有效抑制 sTAT3的表达 ，并抑制肝癌细胞 的生长及增殖 。 【关键词】 肝肿瘤 ； RNA，小分子干扰 ； 信号转导和转录激活因子 TheinhibitoryeffectofRNAionSTAT3geneanditseffectsonHepG2cells DUAN Man—le，GUOJin—ying，WANG Ya，ei．HepingHospitalofChangzhiM edicalCollege，046000，China [Abstract] Objective Tostudytheeffectsofsilencingsignaltransducersandactivatorsoftranscription3 (STAT3)withRNA interference(RNAi)techniqueonthegrowthandapoptosisinHepG2hepatocarcinon1acells． M ethods ThreerecombinantplasmidspGenesil—。1——shRNA—。STAT3are constructed and transfected into HepG2 cells．TheexpressionofSTAT3genewasdetectedbvRT PCR andwesternblot．MTT wasusedtodeterminethe changeofcellproliferationofHepG2cells．Results ThreepGenesil一1一shRNA—STAT3recombinantplasmidswere successfullyconstructed，andtransfectedintoHepG。cells．RT—PCR andwesternblotanalysisdemonstratedthat pGenesil一1～shRNA—STAT3could significantly inhibitthe expression ofSTAT3 in HepG2 cells；MTT results showedthattheycouldsuppressthegrowthofHepG?cells．Conclusion SilenceofSTAT3with shRNA could significantlyinhibitS1、AT3expressionandsuppressthegrowthofHepG￡cells． [Keywords] Liverneoplasms； RNA，smallinterference； Signalstransducersandactivatorsoftransc