线粒体K-%2cATP-通道对心肌损伤大鼠线粒体膜电位影响实验与研究.pdf

中文摘要 中文摘要 第一部分新生大鼠心肌细胞的体外培养 目的：应用酶消化法进行体外新生大鼠心肌细胞的原代培养。 化心肌组织多次，收集的细胞用含20％胎牛血清的DMEM培养基混悬并过滤， 采用差速贴壁法纯化心肌细胞后台盼蓝染色计数存活心肌细胞百分比，检测心 肌细胞活性。之后将混悬于培养基中的心肌细胞置于C02培养箱孵育，连续观 察并记录心肌细胞生长情况及形态变化，每2．3天换液一次。心肌细胞培养72h， 阳性表达率，检测心肌细胞的特异性。 结果：1．采用0．08％胰蛋白酶和0．06％胶原酶联合消化心室肌组织，心肌细胞 的收获率高，细胞分散效果好，无明显的组织碎块和细胞碎片。 2．差速贴壁后，台盼蓝染色检测心肌细胞活性，存活率为95．6％，95％ 可信区间(CI)为(89．9％，99．1％)。 3．培养的心肌细胞2~3h后开始贴壁生长，12～24h明显增殖，3~4d后细 胞汇合成片。在倒置显微镜下心肌细胞呈圆形，梭形，多角形，伸出伪足，出 现自发性节律性搏动。 的可信区间(CI)为(90．4，97．6)。 结论：1．应用酶消化法可简便，快速地获得大量活力高，特意性强的心肌细胞。 2．体外培养大鼠心肌细胞可以为心脏生理、病理及药理的实验研究提供 新模型。 关键词：心肌细胞；体外培养；酶消化 中文摘要 第二部分线粒体KATv通道对心肌损伤大鼠线粒体 膜电位的影响 目的：研究线粒体KATe通道开放保护异丙肾上腺素致体外培养大鼠心肌细胞损 伤的线粒体机制。 方法：应用10}tM异丙肾上腺素连续48小时作用于体外培养的大鼠心肌细胞建 立模型。实验分为两部分：第一部分观察线粒体KAy,通道开放对线粒体膜电位 的影响；第二部分观察线粒体Kaxv通道开放对线粒体通透性转换的影响。培养 的大鼠心肌细胞随机分为对照组(CON组)、异丙肾上腺素造模组(ISo组)、 lmM 加入500pM 组)(在造模前20min加入5mMCsA)。第一部分应用流式细胞仪记录各组线粒 体膜电位的变化；第二部分进行线粒体分离提纯，应用紫外分光光度仪检测线 粒体体积，并用Cacl2处理15min观察线粒体体积的变化趋势及程度。 结果：1．ISO组(模型组)红色荧光细胞数占总细胞数的比例为37．19士2-31％， △、I，m水平较CON组明显降低，与CON组84．76士1．73％相比差异有统计学意义 异性mitoKgTe通道阻滞剂)进行干预，检测红色荧光细胞所占比例为 46．07j：2．1 的保护作用。 2．ISO组(模型组)红色荧光细胞数占总细胞数的比例为37．19a：2．31％， Ⅱ 中文摘要 统计学意义(q=39．53。P0．01)，Aym恢复极化状态。 mPTP开放，线粒体体积没有出现明显增大较初始状态变化不大，与CON组 线粒体体积较初始状态增大，与ISO组0．0702士0．0103相比差异有统计学意义 粒体体积较初始状态变化不大，与NIC+ISO组0．2187士0．0089相比差异有统计 结论：1．ISO可以使心肌细胞线粒体膜电位耗散／降低。 2．ISO可以使心肌细胞线粒体通透性转换孔开放。 3．抑制线粒体通透性转换孔开放可以防止ISO引起的心肌细胞线粒体膜 电位耗散／降低。 4．线粒体ATP敏感性钾通道开放剂尼可地尔可以拮抗ISO引起的心肌 细胞线粒体膜电位耗散／降低。 5．线粒体ATP敏感性钾通道开放剂尼可地尔可以拮抗ISO引起的心肌 细胞线粒体通透性转换孔开放。 关键词：线粒体膜电位；线粒体通透性转换孔；异丙肾上腺素；大鼠心肌细胞 III Abstract Abstract neonatalrats Part1 Vitro the culture