用基于反转录转座子的分子标记IRAP分析茄子品种的遗传多样性.pdfVIP

Nov．2009，Volume3，No．11(SerialNo．24) JournalofAgriculturalScienceandTechnology,ISSN 1939-1250,USA 用基于反蒋绿蒋座子的分子檩 IRAP分析茄子品程的遗傅多檬性 ‘ 王利英 ’。。趟福宽’，王秋锦 ，碌请鹏 ，榜爱珍 ’ (1．北京震擎院生物技街系，北京 102206；2．天津蔬菜研究所，天津 300384) 摘 要：IRAP(InterRetrotransposonAmplifiedPolymorphism)是一檀基于反搏绿辩座子的分子檩吾己 技衍。本文虑用畿獯Copia额型的反祷绿鞲座子造行引物彀计 ，封 35份茄子栽培品獯造行了基于IRAP的 遗傅多檬性分析。根掾 Tnt1，Ttol，Tnd．1和 Bare．1彀计的6佃引物共搪增出195僚带，多您性带 179 僚，多您性比率平均属91．8％，每佃引物桧测到多您性带25．33僚，平均焉29．8僚。Nei’S遗傅相似系敷在 0．3540．0．7752之同，平均相似系数焉0．5901。多维尺度分析绽分子水平将供弑品往分焉4佃赖群。 网键匍：反祷绿蒋座子；IRAP；茄子；遗傅多檬性 IRAP ( Inter Retrotransposon Am plified 本文用 IRAP分子檩 封柬源于不同固家和地 Polymorphism)是由Kalendar建立的一穗用柬榆测 匾的代表性茄子品獯的遗傅多檬性造行分析，旨在 反蒋绿蒋座子插人位黠同的多憋性的分子檩 技 徒分子水平了解茄子不同品獯同遗傅基磋的差异， 衍 】其原理是根攘反蒋绿蒋座子LTR的保守序列 餍茄子檀耍资源的鉴定和分颊以及资源的有效利 毅 引物，逭些引物在 PCR遇程中可以舆 LTR反 用提供理输依掾。 蒋绿蒋座子的相虑匾域退火，徒而搪增出相郯的同 一 家族的反蒋绿耱座子成员同的片段 2【。J。反蒋绿蒋 1．材料舆方法 座子是真核生物中敷量最堂富、分布最庸的蒋位元 件，包括畏末端重後序列 (1ongterminalrepeats， 1．1供弑材料 以柬源于不同圆家和地匾的 35份茄子品檀禺 LTRs)和非畏末端重後序列 (non．1ongtemrinal repeats，non．LTRs)的反蒋绿蒋座子雨佃频型4【J。 弑材，依掾果寅外部形总可分届畏茄、圆茄和卵圆 LTRs反蒋绿蒋座子是研究得较多的反耱绿蒋座子， 茄。供弑材料的名稻、果寅陛|状及来源兄表 1。 1．2就黢方法 其雨侧翼具有畏末端重後序列，其畏度徒 100bp到 1．2．1供弑材料檀植及DNA提取 5kb不等。理 上反耱绿蒋座子能以任意方向整合 将 35份供弑茄子材料按照常规育苗栽培管理 入基因组中，因此同一侗反蒋绿蒋座子家族的雨佃 檀植于温室，每份材料不少于 10株。茄子幼苗畏 成员可以按照三獯形式相郯 ：颈封顽，尾封尾和颈 出2．3片真藁畴，每品獯随横送取5株各采 1片嫩 封尾。前雨穗形式祗需一佃反向引物就可以麈生 PCR麈物，後一穗形式则必须用 5和 3LTR雨佃引 莱 (足够提取200．1000ng的DNA量)，采用改良 物 ]。缝Kalendar利用 方法成功槽建大套指纹圃 CTAB法提取茄子基因组DNA。在果寅成熟期觏察 绿果形、果皮颜色等植物 陛状。 谱後，造一步研究表明该檩 多憋性水平棰高。Petr 1．2．2引物合成 利用 Tv3一gypsy颧型反蒋绿蒋座子毅 的5僚引