酶联免疫在食品检测中的应用进展.docVIP

酶联免疫法在食品分析检测中的应用 lyz 摘要: 介绍了酶联免疫吸附实验原理, 阐述了该技术在食品安全检测中的应用研究进展。讨论了该技术的发展趋势及其应用前景 关键词: 酶联免疫法;食品分析;检测 The Application of ELISA in Food Analysis Determination Student majoring in food engineering，Yizhe Liu Abstract: The technology of Enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) was briefly introduced. Meanwhile, the application of ELISA in analysis of food safety and determination progress were commented, including pesticide residue, animal drug residue, food toxins, pathogenic microorganisms and the compositions of genetically modified foods, etc. The development tendency of ELISA and its application prospect were discussed. Keywords: Enzyme-linked Immunosorbent assay (ELISA); Food analysis; determination 1 引言 我国的食品安全问题已不再单纯的是一般的质量问题，食品自然甚至人为地污染日趋多样化和复杂化，紧抓食品安全控制成为了关系国计民生的大事，人民和政府的高度重视迫使食品科技不断增加新的检验项目，利用新的科技手段不断提高检验水平和质量、效率。现今，食品安全检测正朝着快速、灵敏、简便的方向发展。酶联免疫技术正是迎合了这一方向而被越来越多地应用于食品安全检验领域的。 2 酶联免疫吸附技术概述 1971年瑞典学者Engvail和Perlmann,荷兰学者 Van Weerman和Schuurs分别报道将免疫技术发展为检测体液中微量物质的固相免疫测定方法，即:酶联免疫吸附测定法(Enzyme-linked Immunosorbent Assay, ELISA)[1]。 ELISA是目前应用最广泛、发展最快的一项酶免疫技术，它是将可溶性抗原（抗体）吸附到某种固相表面，并保持抗原（抗体）免疫活性，这样在与标本中抗体（抗原）反应后，只需经过固相的洗涤，就可以达到抗原抗体复合物与其他物质的分离，大大简化了操作步骤[2]。 2.1 ELISA测定原理 图1 ELISA测定原理（以间接法为例） ELISA现在已成为目前分析化学领域中的前沿课题，它将酶促反应的高效率和免疫反应的高度专一性有机地结合起来，可对各种微量有机物含量进行测定。ELISA检测技术的基本原理是将酶分子与抗体或抗抗体分子共价结合, 此种结合不会改变抗体的免疫学特性, 也不影响酶的生物学活性。在测定时, 酶标抗体可与吸附在固相载体上的抗原或抗体发生特异性结合,受检样品与固相载体表面的抗原或抗体起反应。用洗涤的方法使抗原抗体复合物与其他物质分开。加入酶反应的底物后, 底物被酶催化成为有色产物, 颜色反应的深浅与样品中相应抗体或抗原的量呈一定的比例关系。故可根据呈色的深浅进行定性分析或通过酶标仪进行定量测定。由于酶的催化效率很高, 间接地放大了免疫反应的结果, 使测定方法达到很高的敏感度[ 3, 4]。 2.2 ELISA分类 ELISA方法的分类至今还没有一个统一的标准[5],最常用的测定方法有三类: (1)间接法测定抗原:将特异性抗原包被在固相载体上,从而形成固相抗原, 加入待检样品(含相应抗体),抗体与固相抗原形成抗原-抗体复合物,再加入酶标记的抗抗体(又称二抗)与上述复合物结合,此时加入底物,复合物上的酶则与催化底物反应而显色,由于每步之间均有冲洗步骤。因此,若样品中不含相应的抗体,酶标抗体则将被洗掉,底物不显色而呈阴性反应;若样品中含相应的抗体,底物显色则呈阳性反应。 (2)双抗体夹心法测抗原:将已知的特异性抗体包被在固相载体上形成固相抗体,加入待检样品(含相应抗原),其中抗原与固相抗体结合成复合物,再加入特异性的酶标抗体,使之与已形成的抗原-抗体复合物结合, 当加入底物时,酶则催化底物而显色,根据颜色的有无和深浅,对待测抗原进行定性和定量分析。 (3)竞争法测抗原:将特异性抗体与固相载体联结,形成固相抗体,加入待测样品(含相应抗原)和相应的一定量的酶标抗原,样品中的抗原和酶标抗原