应用分光光度法测定气管炎疫苗不同菌种原液配制浓度方法的研究.pdfVIP

应用分光光度法测定气管炎疫苗不同菌种原液 配制浓度方法的研究 白春杰，钱锐，林峰，吴青兰 (江苏延申生物科技股份有限公司，常州213018) 摘 要：目的建立应用分光光度法测定不同菌种原液的配制浓度的方法。方法 采用细菌比浊法和分光光度法 进行对比研究，比较方法优劣，利用线性回归方程，确定不同菌种原液配制浓度A值范围。经过方法验证证明分析 方法的科学性、准确性和可行性。结果不同菌种原液配制浓度在660hm波长下A值范围分别为：甲型溶血性链 球菌原液配制浓度A值范围为：1．08一1．27；白色葡萄球菌原液配制浓度A值范围为0．48—0．57；奈瑟氏双球菌原 液配制浓度A值范围为0．50～0．60。3种菌液等比例混合配制半成品，在660hm波长下测得A值范围为0．65— 0．80，符合《中国药典》规定。结论分光光度法专属性强、线性好、范围准确可靠，可进行原液浓度定量分析。 关键词：细茵比浊法；分光光度法；原液浓度和配制浓度；定量分析 1957年，上海的科研人员从支气管哮喘病人和 甲型溶血性链球菌原液(批号：32212／08001、 小儿咽拭或鼻拭培养中分离出细菌，制成自家疫 苗，治疗支气管哮喘，效果不错。后来改用呼吸道 常见细菌制成所谓的存储疫苗，提高了疗效。1965 年起，选出了呼吸道细菌(甲型溶血性链球菌、白 色葡萄球菌和奈瑟氏双球菌)，经过培养之后，取 1)；紫外可见分光光度计(型号：uV一1601PC)。 以菌体用甲醛溶液杀菌，后用磷酸盐缓冲盐水 2样品稀释 (PBS)或其他适宜的溶液稀释成每l毫升含菌6亿将试验样品先按“中国细菌浊度标准”分别稀 菌液的气管炎疫苗。主要用于因伤风感冒或上呼吸 释含菌为50亿菌／ml，同一均质样品，经过多次取样 道感染而引起的支气管哮喘、哮喘性支气管炎及慢 进行2倍系列稀释，稀释后取下列样品点浓度：即甲 性支气管炎的预防。 型溶血性链球菌原液取12．5亿菌／rnl、6．25亿茵／ 气管炎疫苗原液浓度通常按细菌比浊法进行测 定，比浊法即用目测法检测每毫升细菌悬液含有的 ml；白色葡萄球菌原液取25亿菌／IIll、12．5亿菌／ 细菌数。其缺点是受卡片图形清晰程度、光线明暗 和肉眼视力好坏等因素影响，测定误差大。而分光 0．78125亿菌／ml；奈瑟氏双球菌原液取25亿菌／ 光度法是通过测定被测物质在特定波长处的吸光 度，对该物质进行定量分析的方法。该方法可以校 1．5625亿菌／ml、0．78125亿菌／ml。 正目测法所带来的偏差。因此，为控制产品质量，保 在660nm波长下测A值：上述样品点浓度用分 证其安全、有效，特别是不同菌种原液的配制浓度， 光光度法心’，在660nm波长下测定A值，每个稀释 该浓度准确性直接关系到产品质量稳定。我们应用 后样品点浓度测2次，检测结果作为被测样品浓度 药典收载分光光度法来测定不同菌种原液配制浓 的函数作图，观察是否呈线性，用最dx--乘法进行线 度。通过实验建立了用分光光度法测定不同菌种原 性回归。 液的配制浓度方法，并确定其范围。经过方法学验 3范围规定值 证其专属性、线性、范围、准确度和精密度，确认方法 不同菌种原液的配制浓度均为6亿菌／ml，范围 具有可行性、再现性和稳定性¨】。 规定值为配制浓度标示量±10％。然后3种菌液按 等比例混合，配制成半成品，半成品浓度为lml含菌 材料与方法 6亿，在660nm波长下，用分光光度法测定A值应为 1实验材料 0．65。0．80，即符合《中国药典》规定的范围∞】。 ·427·