白牦牛卵巢卵母细胞体外成熟与体外受精的研究.pdfVIP

巾国畜牧兽医学会动物繁殖学分会第十三腾学术研讨会论文集 自牦牛卵巢卵母细胞体外成熟与体外受精的研究 阎萍1，潘和平2，郭宪1，许保增1，曾玉峰’ (I。率蓬袁泣辩学院兰建畜牧与善药研究所兰媸730050；2．西托民族大学兰捌730030) 摘要：研究了不同激素配澎、性周期阶鞭对白牦牛卵母细胞体外成熟的影响，同时研究了不同 mmoi／L丙酮酸钠+10％NBS+5．0 培养基对早期胚黪体外发育的影嘀。结果表瞬：M199+o．2 mg／L LH+O．5 FSH+117§-E：是白牦牛卵母细胞体夕卜成熟较为理想的培养系统(成熟率 mg／L P．g／mL 79．4％、卵裂率42．5％)。采集白牦牛卵母细胞时卵巢所处性周期阶段(卵泡期、黄体期)影响卵母 细胞的体外成熟(成熟率分别为77．6％、69．5％，卵裂率分别为45．7％、35．6％)。输卵管上皮细胞 和颗粒细胞楚理想的共培养细胞，能有效克服白牦牛早期胚胎发育阻滞(桑囊胚发育率分另q为 lO．6％、7。7菇)。 关键词：由耗牛；卵母细胞；体外成熟；体外受精；傣外发育 鑫牦牛是孛冒稀有珍贵瓣耗牛地方类群褰遗传资源，是经过长期鲁然选择_帮人工选育丽形成的 独特畜种，主要分布于甘肃销天祝藏族自治县海拔3000米以上高寒牧区，其被毛洁白如雪，被誉为 “祁连自牡丹”、“雪域白珍珠”。在甘肃天祝藏族自治县毛毛山沿麓地区，现有自牦牛3．94万头， 露符合瑷想翡纯自牦牛只有0．4万头占10．嬲驻’。爵其珍贵稀少，2000年被捌入“国家级畜禽品种 资源保护名录”确定为全国78个重点保护畜禽品种之一，保护天祝自牦牛已成为保护家畜遗传多样 性的主要内容。本实验利用屠宰自牦牛的卵巢研究不同激素配比、性周期阶段对卵母细胞体外成熟 的影响及不耐培养基对早期胚胎体外发育的影响，为建立白牦牛早期胚胎体外生产体系奠定基础， 对稀有珍贵动物遗传资源尤其是囱牦牛的保护具有重要意义。 1材料与方法 I．I卵巢的采集与保存 白牦牛卵巢采自甘肃天祝藏族自治县牦牛定点屠宰场，淘汰白牦牛宰杀后30min内取出卵巢， 置于3038℃灭菌生理盐水(含青霉索、链霉素)中，于6h内运回实验室。 l。2卵巢卵母细胞豹采集 白牦牛卵巢带回实验室后，用灭菌生理盐水洗涤3～5次，盛于大烧杯中。用5吐或lO畦的一次 性注射器，从直径28mm的卵泡中抽吸卵泡液，将抽取的液体注入灭菌检卵胍内沉淀3～5min，在 体视显微镜下检取赛丘一舞母缨胞复合体(CumulusOocyte 胞抽吸屠，将卵巢置于盛有PBS的培养皿中，用镊子固定卵巢，然后用一组特制刀片(由3,5个单面 刀片或双面刀片平行排列组成)进行纵横切割。再用采卵液反复冲洗，将冲洗液全部放入检卵杯中， 用注射器吸去上清及上褥豹泡沫，置体视显微镜下检出COCs。 1．3卵母细胞的体外成熟 26 Penicillin 加O。2mmol／L丙酮酸钠(AMRESCO)、0。075mg／mL G(Sigma)、0．050mg／mLStreptomycin 有限公司)及E2(Sigma)。 捧者篱奔：阁萍(1983一)，女，研究员。研究方向：动物繁育。 项目来源：中国农业科学院院长基金 l酪 串藿蛮牧兽医攀会动物繁殪学分会第十三羼学术研讨会论文集‘ 皇曼曼篡尝量笪舅麓蔓曼曼蠛笪曼曼黑拦曼曼曼燃笪曼曼黑皇曼曼寰堂曼曼酬I IIII I蔓曼量囊笪曼曼黑皇量 1．4成熟卵母细胞的体外受精 取天祝叁牦牛冷冻精液细管，37℃水浴解冻，勰冻嚣的精液加入盛肴l。2畦BO获熊液(BO+10 腿／mLBSA+10地／mL肝素)的离心管底部，在C0。培养箱中倾斜放置，使精子上浮。上浮1h后， 吸取上清液0．5～O．8 min／次)。离 mL，用洗精液(不含双抗的BO液)离心洗涤两次(7009、810 心洗涤后的精子沉淀，臻获麓滚再次主浮20--30min