对高致病性猪蓝耳病易感性不同的品种的临床特征和差异表达基因研究.pdfVIP

对高致病性猪蓝耳病易感性不同的品种的临床特征和差异表达基因研究.pdf

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中国畜牧兽医学会养猪学分会2009年学术年会 “回盛生物”杯全国养猪技术论文大赛论文集 对高致病性猪蓝耳病易感性不同的品种的 临床特征和差异表达基因研究 周平1,周翔1,翟珊莉1,林平1,胡薛英2,江云波3,吴斌3,徐学文1,刘榜1’ (1-农业部动物遗传育种与繁殖教育部重点实验室&农业部猪遗传育种重点开放实验室,华中农业大 实验室,华中农业大学,武汉430070) 摘要:使用高致病性PRRSV-Wuh2毒株,通过肌肉注射分别感染5周龄通城仔猪和大白仔猪。感染后 每日测量仔猪体温,观察并记录临床症状,采集血样用于血常规和病毒含量测定。感染后5-7天屠 宰,采集血样及组织样,灌洗收集肺泡巨噬细胞(PAM)并提取RNA,取感染前后通城猪和大白猪(2 性猪蓝耳病后表现出典型临床症状与病变,但通城猪的病症要轻于大白猪。芯片数据分析表明,大 调,17个属于下调,和炎症有关细胞因子有8个上调。通城猪感染前后有230个差异表达基因,其 中160个上调,70个下调,与炎症有关细胞因子2个下调,10个上调。感染后两个品种炎性细胞因 子表达差异可能是病变差异的主要原因。 关键词:猪,高致病性猪蓝耳病,猪肺泡巨噬细胞,hffymetrix基因芯片,炎性基因 猪繁殖与呼吸综合症病毒(Porcine and virus,PRRSV)可引 ReproductiveRespiratorySyndrome 发猪的重大传染性疾病猪蓝耳病又称猪繁殖与呼吸综合症(Pl汛S),严重危害了我国养猪业的发展。 PRRSV感染以妊娠母猪繁殖障碍和各年龄段猪呼吸道症状为主要特征。其主要靶细胞是猪肺泡巨噬 alveolar 细胞(porcinemacrophages,PAM)。 2006年,被称为“高热病”的PRRS在中国大面积暴发,疫情波及10多个省(市、区)。这场疫 eta1. 2005)。在高致病性PRRS的暴发期间,不同品种的易感性存在差异,国外引进品种(大白、长白、 杜洛克)发病急、死亡率高,而地方品种通城猪表现出对高致病性PRRS的不易感(一定抗病力) eta1. 2007),而地处三省交界的湖北通城县境内经调查无一例通城猪发病。 本研究针对我国优良地方品种资源通城猪的优良种质特性——对高致病性PRRS具有一定抗病 猪基因组芯片比较在人工感染高致病性PRRSV后,两品种间基因表达的差异。并通过比较临床症状、 病理变化、血液指标、病毒载量等信息进行综合分析,初步探索通城猪对高致病性猪蓝耳病抗性的 遗传基础,从而为PRRSV的抗病育种提供理论依据。 本项目受转基因新品种重培育重大专项(2009ZX08012一OISB)的资助 1.hzau.edu.CII 通讯作者:liubang@mai 338 猪病防治篇 1材料与方法 1.1试验材料 1.1.1病毒与质粒 PRRSV-Wuh2ORF7重组质粒也由该室提供。 1.1.2试验动物 分别选取12头5周龄大白和通城仔猪,大白猪来自荆州三湖猪场早期断奶的净化群体,通城猪 来自通城县种畜场。所选猪群用PCR或RT-PCR方法抽样检测肺组织中的PCV和肺泡巨噬细胞中的 为阴性的猪作为本试验用动物。 1.2试验方法 1.2.1动物的人工感染及芯片杂交 12头通城猪和12头大白猪分别来自于3窝,每窝4头全同胞,在分组时将4头全同胞平均分 配到试验组和对照组,每个品种试验组和对照组均6头动物。两个品种的试验组和对照组动物混合 饲养进行预试,预试结束后将对照组全部屠宰,试验组进行人工感染。 观察并记录临床症状,采集血样用于血常规和病毒含量测定。感染后5.7天屠宰,采集血样及组织 样等用于血常规、病毒含量、石蜡组织切片等分析。灌洗收集肺泡巨噬细胞(PAM)并提取RNA, 取感染前后各3个个体(2个

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