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乳腺细胞凋亡及其研究进展1 侯晓明，李庆章* 东北农业大学乳品科学教育部重点实验室，黑龙江 哈尔滨 150030 Email：qingzhangli@ 摘 要：细胞凋亡是21 世纪生物学中最受关注的研究热点之一。乳腺细胞凋亡是乳腺生物 学重要的研究方向，其在乳腺组织的结构形成、功能分化中发挥重要作用。近年来乳腺细胞 凋亡研究已经有了长足进展。本文就细胞凋亡的主要研究方法以及乳腺细胞凋亡的最新成果 作一综述。 关键词：细胞凋亡；乳腺；退化 1．引言 凋亡 （Apoptosis，AP ）是细胞的程序性死亡过程(Programmed cell death ,PCD) 。凋亡过 程中，不再需要的或受损伤组织的细胞发生程序性死亡。在乳腺的整个妊娠周期中都伴随着 细胞凋亡的发生，特别是在断乳后，乳腺进入一个退化过程，伴随着大量乳腺上皮细胞的凋 亡，乳腺组织逐渐恢复到妊娠前的状态，从而为下次的妊娠做好准备。乳腺细胞的增殖和凋 亡共同处在动态平衡之中，凋亡不只发生在乳腺的退化期，在青春期、妊娠期、泌乳期也伴 随着凋亡的发生[1] 。乳腺上皮细胞的凋亡对乳腺的发育和功能的形成都有重要作用，发育中 乳腺导管的形成以及断乳后除去多余的乳腺上皮细胞都有细胞凋亡发生[2][3] 。 2 ．乳腺发育过程简述 在整个乳腺发育过程中，乳腺功能分化是其中的关键步骤。以小鼠为例，小鼠刚出生时 就有未发育的微小乳腺导管，发育速度很慢。直到青春期开始加速发育，逐渐形成遍布整个 乳腺脂肪垫的导管树。在妊娠期，乳腺导管出现大量分支同时产生大量乳腺腺泡。直到分娩 并开始泌乳，乳腺发育达到最大程度，乳腺上皮细胞此时分化水平最高。小鼠断乳1 天左右 乳腺就开始退化，伴随着乳腺细胞凋亡、中性白细胞的进入、巨噬细胞的吞噬作用等，乳腺 逐渐恢复青春期形态[4] 。 3 ．细胞凋亡的特征 细胞凋亡是细胞的正常死亡,它是细胞在一系列基因的激活、表达、调控等作用下而采 取的主动死亡过程,不造成炎症和自体的损伤,因这一死亡过程严格受到程序的控制,又称细 胞程序性死亡。 凋亡细胞有一系列不同于坏死细胞的特征：态学上的特征是细胞凋亡早期核染色质浓聚， 1基金项目：黑龙江省自然科学基金重点项目（ZJN0504 ） -1- 聚集在核膜周围。然后是胞浆浓缩、胞膜突起呈泡状, 然后细胞核碎裂, 细胞膜将胞质和染 [5] 色质断片包裹, 胞浆内形成多个膜包裹的凋亡小体（apoptosis body ） 。1972年Kerr等就是 首先根据形态学上的差别区分凋亡细胞和坏死细胞[6] 。 除了形态学的改变，在凋亡发生早期还发生很多内部的生化变化：核酸内切酶被激活， 将DNA切成180～200bp整数倍的DNA ，坏死细胞就没有这种DNA断裂的规律性。凋亡细胞 的胞膜成分亦发生改变,如原来位于细胞膜内侧的磷脂酰丝氨酸(PS)迁移至脂双层外侧等[7] 。 4 ．细胞凋亡的研究方法 凋亡细胞的识别与检测是细胞凋亡基础研究和应用研究必须解决的问题,其检测方法颇 多，较成熟常用的主要有以下几种。 4.1 电镜形态学观察： 虽然光学显微镜下可以看见胞膜起泡现象和凋亡小体, 但凋亡细胞的形态学变化大多 发生在超微结构, 因此用光镜观察难以令人满意, 而透射电镜可清楚地观察到细胞结构在凋 亡不同时期的变化。电镜下凋亡细胞最显著的特征为染色质沿着核膜内层浓缩成界限清楚的 半月形团块,最后形成有膜包裹的凋亡小体。目前认为电镜方法辨认凋亡细胞最为特异,但需 特殊设备,且观察的细胞数量有限,不适于大批标本的检测。 4.2 DNA 凝胶电泳 凋亡早期核酸内切酶将DNA切成180～200bp整数倍的片段,在凝胶电泳中可以形成梯状