益气化瘀补肾方及拆方调控椎间盘细胞外基质胶原、MMPs与TIMP+mRNA表达的研究.pdfVIP

中华中医药学会骨伤分会第四届第二次学术大会论文汇编 活细胞转化后没有结晶形式，直接溶于水，不需使用有机溶剂，因而也不会因为溶解的不彻底而影 响检测结果h…’。 本研究结果显示，柔肝单味药提取物及复方未表现出明硅的促进人骨关节炎软骨细胞增殖的能 力，但同组内不同时间点相比，随观察时间推移，表现一定促增殖能力，特别在培养的卜3天较3—5 天更为明显。这种情况可能因为人骨关节炎软骨细胞活力较差，增殖能力低下有关，药物刺激效果 不敏感，特别是在培养早期细胞表现一定增殖能力，但很快增殖速率下降。 COMP是关节软骨细胞外基质的～种大分子，外周COMP的高水平表达作为一种关节软骨早期退 变的较为灵敏的标志物，正越来越多地受到关注和研究。Vilim等人的研究认为血清COMP水平与滑 膜炎和骨关节炎的严重程度密切相关。h川本研究也使用了药物直接干预的方法观察对培养体系软骨 细胞分泌Co胛的情况。结果显示，在下游蛋白表达层面，柔肝单味药提取物及复方均有上调人oA 软骨细胞分泌COMP的作用，但各二组间未见有明显差异。虽然由基质游移于体液内的COMP可能是 病情的标志物，然而这种细胞分泌于基质中的COMP究竟起到生理或病理性的作用尚有待在今后的研 究中迸一步阐明。 益气化瘀补肾方及拆方调控椎间盘细胞外 基质胶原、MMPs和TI咿lIIR№表达的研究 上海中医药大学脊柱病研究所上海中医药大学附属龙华医院 李晨光施杞王拥军周泉胡志俊刘梅周重建 材料与方法 1．实验动物： 补肾方组、益气化瘀方组、益气补肾方组、化瘀补肾方组、莫比可组、模型组和假手术组，每组10只。 由上海中医药大学动物中心提供，合格证号：“SYXK(沪)2004--2005”。 2．造模方法n1：将模型组大鼠按0．ig／kg体重行氯氨酮腹腔注射麻醉，颈后部剪毛，碘伏消毒，取 颈背部正中纵向切口，长约2—2．5cm，切口皮肤后，充分游离各层肌肉，横向切断深层颈夹肌和头、颈、 寰最长肌，完全切除颈髂肋肌和头半脊肌，然后再依次切断颈2—7棘上和棘间韧带。假手术组仅切开 皮肤，然后直接缝合。大鼠造模术后，有5个月的造模期，再灌胃1个月后，取材。 3．药量换算：用药剂量按“动物体表面积比率换算等剂量法”，由正常成人每日常用剂量换算得出， 大鼠按平均体重5509计算，正常成人按60kg标准体重计算。正常成人中药用量每日一帖，莫比可每日 一片。 4．实验用药：益气化瘀补肾方(黄芪、党参、川芎、丹参、补骨脂、肉苁蓉等)；益气化瘀方(黄 芪、党参、川芎、丹参等)；益气补肾方(黄芪、党参、补骨脂、肉苁蓉等)：化瘀补肾方(川芎、丹 参、补骨脂、肉苁蓉等)；莫比可片(国药准字。 174 中华中医药学会骨伤分会第四届第二次学术大会论文汇编 5．取材方法：腹腔注射过量麻醉处死大鼠，在4倍手术显微镜下沿上、下软骨终板与椎体的交界面 切下椎间盘。 的基因及内参照tB-actin引物序列(见下表1) 表1． 目的基因及GAPDH引物序列设计 GeneandGAPDHPrimer Tabl．Purpos Design CGG ACG GAG一3’ sense： 5’-cATTTG TGc ATG CGT CTG-3’ O—actinantisense：5’-GCCATCCTG CTGGAC 扩增产物为599bp Sense： 5’一TGCCGTGACCTCAAGATGTG一3’ GGTGA一3’ 5