小麦与玉米及鸭茅状摩擦禾远缘杂交的胚发育过程中同工酶和蛋白质的变化ChangesofIsozymesand.pdfVIP

遗传 HEREDITAS(Beijing)18(2):7-101996 小麦与玉米及鸭茅状摩擦禾远缘杂交的胚发育过程中 同工酶和蛋白质的变化① 董效成 李大玮 （中国科学院遗传研究所，北京 100101) 摘 要 通过比较小麦与玉米及鸭茅状摩擦禾属间杂交获得的胚与小麦正常自交的胚之间在不同发育时 期过氧化物酶和醋酶的同工酶谱，发现过氧化物酶同工酶表现出时空顺序的特异性变化。在同 一发育时 期，远缘杂交的具胚子房和无胚子房之间存在过氧化物酶同工酶谱的差异，这可能涉及到与胚发育相关 的同工酶的出现。远缘杂交的具胚子房和正常自交的小麦子房之间也有一定的酶谱差异。同时，同一材 料还表现出不同发育时期的过氧化物酶酶谱差别。在远缘杂交后的胚发育期间，醋酶同工酶的时空表达 不如过氧化物酶显著。此外，对远缘杂交后的胚中的水溶性蛋白质进行了SDS分析，初步的分 析结果表明，可能存在与胚发育相关的蛋白质． 关键词 小麦，玉米，鸭茅状摩擦禾，胚发育，同工酶，蛋白质 ChangesoflsozymesandProteinsDuringEmbryoDevelopment inCrossesofWheatwithZeamaysandTripsacumdactyloides DongXiaocheng LiDawei (InstituteofGenetics,AcademiaSinica,Beijing100101) 普通小麦 T（riticumaestivum）用玉米或鸭茅状摩擦禾 T（ripsacumdactyloides）花粉授粉后可以高频率地获 得胚 (2)。但对于这类通过远缘杂交得到的胚在其发育期间同工酶和蛋白质的分析尚未见有报道．前人的研究结 果表明，过氧化物酶同工酶是一个较好的遗传信息表达的标志，它不但在胚中的活力较强 3〔〕，而且其酶活力和 同工酶的变化，可能还与一些高等植物的发育关系密切 ’（，日15,16,18,19)。酷酶同工酶与胚胎发育也有一定关 系(9（111,17)。由于蛋白质是基因时空表达的产物，可能直接参与胚胎的分化与发育，因而胚胎发育特异蛋白质的 研究备受重视，本文分析了普通小麦与玉米及鸭茅状摩擦禾杂交后的胚发育期间一些同工酶和蛋白质的变化，为 阐明远缘杂交中胚发育过程中的一些生理生化事件做初步的探索． 1材 料 与 方 法 1.1材料 小麦 T（riticumaestivum）品种 F“ukuho”和品系9“3-3600”作为杂交母本材料，玉米 Z（eamays）和鸭茅状 摩擦禾 T（ripsacumdactyloides)为杂交父本。按常规方法去雄，套袋，授粉．授粉后向穗下茎节注人 100pptn 浓度的2,4-D溶液约5m1。用作对照的是相同发育时期的自交授粉的小麦。分别于授粉后5,10,15天取回杂 交穗和自交穗，并立刻投入液氮中，速冻2天后，放置于一80℃低温冰箱中保存备用． ①中国科学院重大科研项目课题资助。 8 遗 传 HEREDITAS(Beijing)1996 18卷 从杂交穗取下子房，解剖后按有胚或无胚分成两组，同时剥取用作对照的子房，一起用于同一L酶和蛋白质的 分析。 1.2方法 同工酶的提取和分析，参照胡能书等的方法 “，． 样品提取液为：50mmol/LTris-HCI,pH7.4，内含2%Nonidet-40(V/V). 分离胶：T=10%,C=2.6%；浓缩胶：T二4%,C=2.6%，上样量为每孔20川． 过氧化物酶显色采用改良的联苯胺法，配方是：2％联苯胺溶液：4%氯化按溶液 ：5%EDTA-Na溶液 ： 0.30,ioH20z溶液：蒸馏水＝1：1：1：1：9(V/V). 酷酶显色采用坚牢蓝 (FastBlueRR）和醋酸一“一蔡醋法。可溶性蛋白质的提取参照Zivy等的方法 20（)． 提取液改为：0.01mol／LTris-HCI,pH8.0,2%SDS,5%琉基乙醇，10％甘油，0.02 澳酚蓝。 蛋白质的SDS电泳参考何忠效等的方法 5〔1．采用不连续梯度胶：下 巧（％）：中 (1（2%) ：上 (1