rhEPO_Fc融合蛋白质量标准的研究.pdfVIP

2011 NO.19 科技资讯 SCIENCE TECHNOLOGY INFORMATION 工 业 技 术 rhEPO-Fc融合蛋白质量标准的研究① 1,2 2 2 2 2 1 2 商阿丽 　唐亮 　曹传平 　 武雪宾 郑玲莉 　 何俊民 　 鞠佃文 （1.同济大学生命科学与技术学院 上海 200092; 2.上海美恩生物技术有限公司 上海 201203) 摘 要:目的:本研究采用的rhEPO-Fc融合蛋白是首次将编码人IgG Fc段的基因与编码人EPO的基因片段连接,并将其克隆至高表达质粒 载体中,用该质粒转染CHO细胞进行分泌表达所得。通过对rhEPO-Fc融合蛋白的质量检验和实验方法参数的选择,建立rhEPO-Fc融合蛋 白的质量标准。方法:采用细胞MTT比色法及Human EPO ELISA试剂盒测定rhEPO-Fc的体外生物学活性,Lowry法测定蛋白含量,SDS-聚 丙烯酰胺凝胶电泳法测定相对分子质量,高效液相色谱法(HPLC)测定纯度,紫外分光光度法测定紫外吸收光谱,地高辛(DIG)标记的核酸 探针法测定外源性DNA残留量,等电聚焦电泳法测定等电点,间苯二酚显色法测定唾液酸(SA)含量。结果:rhEPO-Fc的比活性为1.1× 5 10IU/mg蛋白,蛋白含量为1.58mg/ml,相对分子质量约为59000道尔顿,纯度超过99.0%,紫外最大吸收峰约在280nm波长处,外源性DNA 残留量小于10pg/mg,等电点为4.5～6.5,唾液酸含量为11.92mol/mol蛋白质。结论:所建立的质控方法已用于rhEPO-Fc制品的检定,可 以有效地控制rhEPO-Fc制品的质量。 关键词:rhEPO-Fc免疫球蛋白Fc段 融合蛋白 质量标准 中图分类号:R593 文献标识码:A 文章编号:1672-3791(2011)07(a)-0121-03 Quality standards of rhEPO-Fc Abstract 5 ×10 suitable for the quality control of rhEPO-Fc product. KeyWords:R 促红细胞生成素(erythropoietin,EPO)增加了患者治疗成本,严重降低了患者的 32D1.9细胞为本公司常规传代保存。 是人体内调控红系祖细胞的重要造血因 生活质量。因此如何显著延长rhEPO的半 1.1.2试剂 子,能促进骨髓中红系造血祖细胞的增殖、 衰期,已成为当前生物制药领域中一个极 白蛋白国家标准品购自中国药品生物 分化及血红蛋白合成。天然存在的EPO药 具实用价值的研究热点。 制品检定所 源极为匮乏,不能满足临床需求。重组人红 本研究采用的rhEPO-Fc融合蛋白制 tection kit购自Roche公司 细胞生成素是利用基因工程技术,将人的 品是将编码人IgG 段的基因与编码人 Fc 购自RD公司,rhEPO-Fc为本公司制备。 EPO基因转入CHO细胞内分泌表达获得的 EPO的基因片段连接,并将其克隆至高表 1.1.3仪器 活性糖蛋白,用于慢性肾衰竭和癌症化