铁皮石斛促生长内生真菌的筛选与鉴定.pdfVIP

第 39卷第 17期 2014年 9月 警烹。lo中fChnesee杂teral畚edcia VoSe1p．3t9em，bIsesure，201174 · 资源与鉴定 · 铁皮石斛促生长 内生真菌的筛选与鉴定 侯晓强 ，郭顺星 (1．中国医学科学院 北京协和医学院 药用植物研究所，北京 100193； 2．廊坊师范学院 生命科学学院，河北廊坊065000) [摘要] 石斛生境中存在多种能够促进石斛生长的内生真菌，利用内生真菌与铁皮石斛组培苗共生培养 ，筛选对铁皮石 斛组培苗有促生长活性的内生真菌，研究内生真菌对石斛根的侵染情况 ，采用形态鉴定和分子鉴定的方法对促生长活性内生 真菌进行鉴定。结果表明，8株内生真菌对铁皮石斛苗有促生长作用，均能侵染铁皮石斛根，在铁皮石斛根的根被、外皮层、皮 层中以菌丝或菌丝团的形式存在，不侵染内皮层和中柱，区别于有害真菌。8株活性内生真菌中，2株产孢真菌经形态鉴定，属 于Pestalotiopsis，Eurotium属 ，6株不产孢真菌经分子鉴定，分别属于 renochaeta，Coprinellus，Pholiota，Alternaria，Helotiales等5 个属。促生长活性内生真菌与石斛组培苗共生培养，可促进石斛组培苗生长，对于缩短石斛生长周期，增加石斛中药材资源 具有指导意义。 [关键词] 铁皮石斛 ；内生真菌；促生长活性 ；侵染检测；菌种鉴定 铁皮石斛Dendrobiumofficinale是常用名贵中药 真菌。本试验探讨石斛属植物的内生真菌对铁皮石 材，具有益胃生滓、滋阴清热等功效。由于石斛的自 斛苗的作用，以期获得对石斛苗有促生长活性的内 然繁殖率低，对环境条件要求较严格 ，产区药农长期 生真菌，为人工栽培石斛和组培苗移栽成活提供新 采挖，自然资源已濒临灭绝。虽然石斛组织培养体 的技术手段和理论基础。 系已成功建立，可大量繁殖石斛组培苗，但组培苗移 1 材料 栽成活率低，生长缓慢，成为石斛组培苗人工栽培的 植物材料为铁皮石斛组培苗。内生真菌为分离 瓶颈。兰科植物与真菌能够形成典型共生关系，内 自石斛属植物的36株 内生真菌，由中国医学科学院 生真菌或菌根真菌对兰科植物种子萌发、生长、成苗 药用植物研究所真菌室保存。 具有重要的促进作用。相同生境下的不同兰科植物 PDA培养基：马铃薯200g，葡萄糖 20g，琼脂 有着相似的菌根真菌，而不同生境的同一兰科植物 12g，水 1L；组培培养基 ：1／2MS(大量成分减半)， 有不同的菌根真菌，两者问的共生关系是非专一性 马铃薯 200g，蔗糖 30g，活性炭 2g，琼脂 7．5g，水 的…。范黎等 发现不同的真菌可促进同一种兰 1L，pH5．8；共生培养基：1／2MS(大量成分减半)， 科植物的种子萌发，同一真菌也可与一种以上的兰 蔗糖 7．5g，琼脂 7．5g，水 1L，pH5．8。 科植物的种子形成共生关系。郭顺星等 分离的2 2 方法 株内生真菌对铁皮石斛苗有促生长的活性。吴慧凤 2．1 内生真菌的培养 等 也获得了9株对铁皮石斛有促生长作用的内生 内生真菌接种于 PDA培养基上，25℃黑暗培 养 10d。 [收稿 日期] 2014-02—12 2．2 铁皮石斛组培苗的培养 [基金项 目] 国家 自然科学基金项 目；博士点基金优先 发展领 域项 目(20131106130002)；河北 省 自然 科 学基 金项 目 将铁皮石