近红外荧光探针法测定核酸的研究.pdfVIP

第27@增刊 福州大学学报(自然科学版) v01．27 1222笙!旦 !婴翌型!!曼竖!!!望!!堡!!坠型!堡翌!!!l!些生 苎￡譬：l皇笠 近红外荧光探针法测定核酸的研究 郑洪1，朱昌青2，陈小兰’，陈秋影1，李东辉1，许金钩1 (1．厦门大学化学系，福建厦门361005；2，安徽师范大学化学系。安徽芜湖24{ooo) 摘要：以阳离子花昔染料为荧光探针。依近红外荧光猝灭测定棱酸，最大激发及发射波长分另Ⅱ为 765、790 DNA及SM rltlx．核酸测定的线性范围为0．08--1．2／ag／mL(CrDNA)，0．I～ fygast 1．6地／mL RNA)． 关键词：近红外荧光；核酸；荧光法；花瞢 中图分类号：0657 文献标识码：A 近红外染料因其吸收及荧光光谱均处于近红外区，且摩尔吸光系数高，而生物分子在这 个波段几乎没有荧光发射．困而具有背景千扰小，灵敏度高等优点“’．基于以上考虑，本 文建立了以阳离子型近红外花菁染料做为荧光探针，在近红外区测定核酸的新方法， 6 l仪器与试剂 760CRT型紫外一可见分光光度计(上海第三分析仪器厂)．Hitachi r 650-10S荧光分光光 度计．脱氧核糖核酸CDNA)溶液，上海华美生化试剂公司生产．阳离子近红外花菁染料， 系本实验室依照文献f2恰成．其余试剂均为分析纯． 2实验方法 于10 mL01 mL容量瓶中依次加入0,5 too!／L的六次甲基四胺一HcI缓冲溶液 (pH6．O)，一定量的标准DNA溶液或样品液，以二次去离子重蒸水稀释至刻度，混合均匀； 然后再加入O．3 rain mL近红外花瞢染辩的二甲亚砜(0．1mmo]／L)溶液，混合均匀．放置25 后，以765tim为激发波长，790nm为发射波长测定荧光强度． 3 DNA或RNA对近红外花菁染料体系的荧光光谱的影晌 在DNA或RNA存在条件下，该近红外花菁阳离子染料的激发波长与发射波长保持不 变，但峰的荧光强度降低． 4实验条件的优化 结果表明，pH在5．0K8．0范围内，近红外花菁染料浓度为3．0 Bmo]／L温育时闯为 。 30rain时，，。／F政最大且稳定．参照实验方法测定核酸的工作曲线，结果见表1．结果还 表明，外加物质，如常见无机离子、氨基基酸、碱基等对反应体系没有大的影响，但蛋白质 影响较为显著，须除去后方可测定．合成样品回收率实验结果见表2． 面丽百菇：一1面；一ir～ 作者简介：郯洪(1967-)，男。博士研究生． 基金项目：国家自然科学基金资助项目 戮 增刊 郑洪等：近红外荧光探针法测定核酸的研究 ·123· 表1核酸测定工作曲线 棱酸 线性范围／ng·mL-1 线性方程检测服Ing·mL叫线性相关蒹敷 CTDNA 200 80一l 9+1．916IC 30 F．／F，0．815