mTOR靶向抑制剂雷帕霉素对慢性粒细胞白血病细胞与作用及机制.pdf

中文摘要 roTOR靶向抑制剂雷帕霉素对慢性粒细胞白血病 细胞的作用及机制 摘 要 慢性粒细胞白血病(chronic myelogenous 性白血病中常见的一种类型，可发生于各年龄人群。虽然传统治疗药物羟 基脲、干扰素等在一定时期内可以改善患者症状，但不能治愈本病，也不 能阻断疾病进展。绝大多数患者在一段时期的慢性期后，进入加速期或急 变期，最终因造血衰竭或感染等并发症而死亡。融合基因bcr／abl是慢性 粒细胞白血病的遗传分子生物学特征，其产物Bcr／Abl激酶是发病的关键 因素。因Bcr／Abl激酶具有强烈的酪氨酸激酶活性，目前酪氨酸激酶抑制 kinase 剂(tyrosine 药物应用于临床。在治疗中发现，伊马替尼对慢性粒细胞白血病慢性期有 较好的治疗效果，但仍有部分患者发生耐药。研究表明，Bcr／Abl激酶可 进而影响细胞周期分布以及细胞凋亡等，导致CML发病。‘其中，mTOR 粒细胞白血病治疗中发挥作用。 “哺乳动物雷帕霉素靶点(mammalian target 种丝氨酸／苏氨酸激酶，在调节蛋白质合成、细胞周期分布、细胞增殖及 要的效应分子，是mTOR信号通路功能的主要执行者。mTOR激活可以 白质的合成。研究发现，mTOR信号通路在胃癌、肾癌、小细胞肺癌、宫 颈癌等多种人类肿瘤细胞中表达异常，与肿瘤的发生密切相关。此外， mTOR通路的激活可能参与了急性髓系白血病、淋巴瘤等血液系统恶性疾 病的发生发展，且是Bcr／Abl阳性细胞恶性转化及早期生存过程中的关键 属于大环内酯类化合物，最早作为免疫抑制剂应用于临床。有研究表明， 中文摘要 雷帕霉素对体外培养的多种肿瘤细胞有明显的抑制作用。目前，雷帕霉素 在白血病治疗中的作用机制以及mTOR能否成为慢性粒细胞白血病治疗 中的靶点等问题尚不清楚，已引起学者们的广泛关注。 因此，为了深入探讨mTOR信号通路在慢性粒细胞白血病发生中的 作用以及mTOR抑制剂雷帕霉素对白血病的治疗作用，本实验从以下几 个方面进行了研究：1．慢性粒细胞白血病患者骨髓细胞中mTOR通路的 表达情况；2．mTOR抑制剂雷帕霉素对慢性粒细胞白血病细胞株K562细 胞周期分布以及细胞凋亡的影响；3．雷帕霉素对K562细胞mTOR通路 相关分子表达的影响；4．雷帕霉素联合塞来昔布对慢性粒细胞白血病 K562细胞的抑制作用。本文拟通过以上研究，深入分析mTOR信号通路 据。 本研究论文分为四个部分： 用 骨髓细胞中的表达，探讨mTOR信号通路在CML发病中的作用。 方法：选取2009．2010年河北医科大学第二医院及河北省人民医院初 治慢性期CML患者34例。运用WestemBlot方法检测CML患者骨髓细 结果： 1．1CML患者骨髓细胞mTOR及P．roTOR蛋白表达情况 Western 30．O％， 患者骨髓细胞中p-mTOR阳性表达率明显高于对照组(70．6％w 关(胗O．05)。 1．24E．BPl及P．4E．BPl在CML患者骨髓细胞中的表达 检测结果表明，CML患者和对照组骨髓细胞中4E．BPl蛋白阳性表达 中文摘要 w 临床病理资料的关系，结果表明4E．BPl、P．4E．BPl的表达与患者性别、 年龄无明显相关(胗O．05)。 1．3CML患者骨髓细胞中p70S6K及其磷酸化水平的检测结果 Westem 性别均无明显相关(尸0．05)。 磷酸化水平明显增高，mTOR途径被激活，提示mTOR途径在慢性粒细 胞白血病的发病中发挥重要作用。 分布和凋亡的影响 目的：通过检测mTOR抑制剂雷帕霉素对K562细胞周期分布、细胞 增殖及细胞凋亡的影响，探讨雷帕霉素对K562细胞株的抑制作用。 方法：不同浓度雷帕霉素处理K562细胞株后，采用MTT法检测细 胞增殖情况，运用流式细胞分析技术、RT-PCR以及WesternBlot检测细 胞周期分布的变化及细胞凋