HPLC法测定烟草中氨基酸衍生条件研究.pdfVIP

第十七届全国色谱学术报告会及仪器展览会会议论文集 P-B091 HPLC法测定烟草中氨基酸衍生条件的研究 杨涓” 川渝烟草工业公司技术研发中心，成都610066 本文对高效液相色谱法测定烟草中游离氨基酸条件进行了探索。对衍生时间及重复性、回收率 作了考察。 关键词：游离氨基酸，衍生化，高效液相色谱法 1 前言 氨基酸是烟草中的一类重要化合物，也是烟草中的一类重要致香前体物质，氨基酸的含量与烟草 的品质有着密切的关系，其含量的高低直接影响到烟的吸味和烟气的丰满度【17J。而氨基酸自身也能 分解成香味化合物。因此测定烟叶中游离氨基酸的含量对烟叶和卷烟抽吸质量具有十分重要的意义。 烟草中氨基酸测定方法主要有化学滴定法、氨基酸自动分析仪法、气相色谱法、Accq．Tag法、高效 液相色谱法和传统的茚三酮呈色反应屙用比色法【3l。而烟草行业应用广泛的为高效液相色谱法。目 前，根据文献报道高效液相法检测烟草中氨基酸主要采用柱前衍生，衍生由自动进样器自动完成， 衍生过程快捷、简便，但是，某些氨基酸衍生不充分，分离效果不令人满意。本文采用反相高效液 相色谱法测定了烟叶中的游离氨基酸含量，考察了氨基酸衍生试剂邻苯二甲醛(OPA)衍生时间对 分离效果和含量测定的影响。 ’ 2实验部分 2．1仪器 SERIES 计。 2．2样品处理 选取红塔某个工艺环节的C3F烟丝，烘干、粉碎后，准确称取19磨碎的烟粉置于50ml锥形瓶 OPA试剂至样品瓶中，振荡摇匀，20min 膜过滤，依次吸取200I．tl上清液、300p1硼酸缓冲溶液，lOp,l 后进样。 2．3色谱条件 色谱柱：waters LC-DABS(15cmx4．6mm) 1％醋酸将PH值调至7．2(O．05)，最后加入5ml四氢呋喃，混合均匀。 (士O。05)，然后加入400ml甲醇和400ml乙腈，混合均匀。 流速：1．4ml／mim柱温：40℃；荧光检测器：Ex：340nm，Em：450nm； 洗脱梯度：o~10rainA：100％,-．75％ 10～24minA： 75％—60％ 3结果与讨论 3．1衍生时间的选择 目前。行业内HPLC法检测烟叶中游离氨基酸的方法大都采用自动进样器自动柱前衍生，加入 衍生试剂后立刻进样。考虑到衍生反应需要一定时间，对氨基酸衍生时间作了初步考察。 后，室温下分别衍生反应10min，15min，30min，60min后进样。 ”通讯联系人，杨涓。Email：yan2iuan@pdde56．com 650 第十七届全国色谱学术报告会及仪器展览会会议论文集 结果表明：各氨基酸生成衍生物的时间有所不同，各氨基酸衍生物随时间变化而变化，衍生时 间太短，衍生反应不够充分，而衍生时间过长，则有些氨基酸衍生物会发生分解，。因此，在衍生 15min后，衍生反应比较充分，大部分色谱峰达到最大值，因此，初步选定氨基酸的衍生时间为15min。 间变化见图l。烟样中赖氨酸含量很低，几乎检不出来，而胱氨酸含量相对赖氨酸含量则大的多， 因此，考虑到以上因素，适当延长衍生时间不仅氨基酸总量接近最大值，而且对胱氨酸来说也减小 了误差，赖氨酸虽然衰减快，但因烟样中其含量太低，可忽略不计。综合考虑，确定衍生时间为15min。 5 譬 ‘， 。j 一一 ， ’“1 “。 ^5 ．一 。＼ 5 凹 ， 、、 ． ＼ ∞ 5 日