“益气调血，扶本培元”针法改善快速老化痴呆小鼠SAMP8海马与皮层神经元可塑性的研究.pdfVIP

第五届中国中医药实验动物科技交流会 “益气调血，扶本培元针法改善快速老化痴呆小鼠SAMP8 海马和皮层神经元可塑性的研究 张月峰于建春李谈韩景献 (1天津中医学院第一附属医院分子生物学实验室，2天津中医学院第一附属医院病理室) 【摘要】目的探讨针灸疗法对AD的治疗作用和机制。方法12只SAMP8小鼠随机分为针刺组、非穴组、P8对 照组，每组4只，4只SAMRl小鼠作为Rl对照组。针刺组采用“益气调血，扶本培元”针法；非穴组针刺非穴点：P8 及R1对照组捉抓，均每日一次，共14天。处理结束后，制备脑切片，作甲苯胺蓝染色，光镜下观察，并用病理图像分 析系统进行定量分析。结果P8对照组大脑神经元形态发生退行性改变，尼氏体平均总面积和积分光度、平均单位面积 细胞数目、面数密度、平均单个细胞面积及平均CAI区厚度均明显小于Rl对照组(Po．01)；针刺组神经元形态好于 培元”针法可以改善AD小鼠神经元形态和功能状态，减少或延迟神经元的丢失，对阿尔茨海默病可能有较好的治疗作 用。 【关键词】 针灸疗法阿尔茨海默病神经元图像分析系统 阿尔茨海默病是(Alzhe嘶’s dise嬲e，AD)一种原发性中枢神经系统的退行性变性疾病，以认知水 平下降和近事记忆障碍为主要症状，主要的病理改变包括区域性的细胞丢失、神经元内原纤维缠结和细 胞外B淀粉样蛋白沉积为老年斑。S,aJVIP8小鼠以学习记忆障碍、认知功能低下及神经元退行性改变为 特征，平均寿命364天，是目前研究老年性痴呆比较理想的自然发病模型，与人类老年性痴呆的病理特 征极为相似【11。本实验采用导师韩景献教授的“益气调血，扶本培元”针法，对SMVIP8小鼠进行治疗， 通过对小鼠大脑的病理形态学影响的观察，探讨针刺对阿尔茨海默病的治疗作用，为临床治疗提供病理 依据。 l材料与方法 1．1实验动物及分组 快速老化SAIvIP8小鼠，正常老化SAMRl小鼠，健康雄性，由天津中医学院第一附属医院动物中 作为同源正常对照组。 1．2处理方法 针刺组：采用“益气调血，扶本培元”针法。根据中国针灸学会实验针灸研究会制定的“动物针灸 穴位图谱”取穴。用直径0．25mm，长40ram毫针，针刺膻中、中脘、气海、足三里、血海穴，膻中穴 平刺，进针2-Smm，其余各穴直刺，进针2-3ram，血海穴行捻转泻法，其余各穴均行捻转补法，每穴 行针30秒。每日一次，共14天。 非穴组：毫针直刺双侧肋下两个非穴点，平补平泻30秒。每日一次，共14天。 P8及R1对照组：每日捉抓30秒，共14天。 13形态学检测 324 第五届中国中医药实验动物科技交流会 1．3．1脑组织切片的制作 针刺及捉抓处理结束后，将各组小鼠用10％水合氯醛(400mg／kg)麻醉，开胸，经左心室行主动 脉插管，剪开右心房，以30ml冷生理盐水经升主动脉快速冲洗血管床，随后缓慢灌注冷的4％多聚甲 oC)，用 醛溶液(0．1tool／L磷酸缓冲溶液，PH7．4)60rnl，开颅取脑，在上述灌注液中继续固定过夜(4 机连续冠状切片，片厚5pm，每隔120la111取切片1张，共取5个切面。贴于载玻片上，于600C烤片 30分钟，作甲苯胺蓝染色。 2．观察方法： 2．1形态学观察 于400倍高倍镜下观察各组神经元形态。 2．2图像分析： X104P 高清晰度彩色病理图像分析系统进行定量分析。以0．201urn象素点长，在1．7205m2测量窗下， 测量甲苯胺蓝信号(尼氏体)的总面积和积分光度、平均单位面积细胞计数(个／1．7205×104pm2)及 面数密度、平均单个细胞面积(1am2)、平均CAl区厚度(um)，分析各组小鼠甲苯胺蓝表达的相对 水平。 2．2．1尼氏体总面积和积分光度在CAl区、CA3区及颞叶皮层分别随机选取14个视域，测量其尼氏 体总面积和积分光度，取其平均值进行统计。 X104ll 2．2．2平均单位面积细胞计数(个／1．7205m2)及面数密度：在CA