动物生物化学 教学课件 作者 陆辉左伟勇 主编 第二章 核酸化学.pptVIP

尚辅网 尚辅网 第二章 核酸化学 通过同源性比较,研究不同物种或个体DNA之间的亲缘关系； 通过杂交的严紧性,发现基因的缺失或突变； 通过标记信号的强度,测定某种遗传信息量的多少； 证明某种疾病(如肿瘤)是否与某种基因(如病毒基因)有关。 尚辅网 3.rRNA的结构特点 由两个大小不同的亚基组成，是蛋白质生物合成的场所。 大肠杆菌5SrRNA的二级结构 尚辅网 （一）溶解性 溶于偏碱的溶剂中，可以为乙醇沉淀，容易受机械作用力而断裂。 （二） 黏性 DNA溶液有高度的黏性。 第三节 核酸的理化性质 一、基本性质 （三） 沉降特性 核酸分子在引力场中能下沉的特性。可用超离心法纯化核酸、测分子量、分级分离等。 尚辅网 （四）紫外吸收 嘌呤和嘧啶在260 nm有特异的吸收峰,这个性质用于核酸的分析 尚辅网 1.变性 DNA双螺旋的有序结构受各种理化因子，如热、酸碱、变性剂、有机溶剂以及稀释的作用，转变为无规则的线团结构。 变性的特征 增色效应, 黏度和比旋下降，沉降系数增加，生物学活性丧失 二、核酸的变性、复性与分子杂交 尚辅网 DNA解链曲线 增色效应(hyperchromic effect) 核酸分子加热变性时，其在260nm处的紫外吸收急剧增加的现象。 Tm值 ：当紫外吸收变化达到最大变化的半数值时，此时所对应的温度称为熔解温度（Tm ）、变性温度或中点解链温度。 尚辅网 影响Tm值的因素 1.溶液的性质 2.DNA中碱基组成的影响 大肠杆菌DNA在不同浓度KCl溶液下的熔融温度曲线 尚辅网 2.复性 复性：变性DNA分开的两股链在适当条件下重新生成双链结构的过程 退火（annealing）:热变性的DNA经缓慢冷却复性的过程。 尚辅网 3.分子杂交 当两条不同来源的DNA（或RNA）链或DNA链与RNA链之间存在互补的碱基序列时，在一定条件下可以通过互相配对形成双螺旋分子，这种分子称为杂交分子。形成杂交分子的过程称为分子杂交（molecular hybridization） 。 核酸探针（nucleic acid probe）:某一具有特定序列并且用同位素或其他化学方法标记的DNA或RNA片段。通常是人工合成的。 分子杂交图 尚辅网 利用核酸探针，可以： * * 尚辅网 尚辅网 本章主要内容 核酸的化学组成 核酸的分子结构 核酸的理化性质 尚辅网 核酸（Nucleic acids）—— 19世纪60年代，由Miescher发现。1889年Altmann将其纯化，证明核酸是含磷的酸性生物大分子。20世纪40年代，Avery确定核酸是遗传信息的载体，普遍存在于生命有机体中。 脱氧核糖核酸，DNA （Deoxyribonucleic Acid），在原核细胞是核质的成分，在真核细胞DNA与蛋白质结合形成染色体，少量存在于线粒体。一个生命有机体的每个体细胞（除生殖细胞外）都含有相同质和量的DNA，包含了它的全部遗传信息。 核糖核酸，RNA （Ribonucleic Acid）主要存在于胞液内，真核细胞的核仁和线粒体也含有少量RNA。RNA的量是变动的。主要有信使RNA（mRNA），转运RNA（tRNA）和核糖体RNA（rRNA）。 病毒或者是DNA病毒或者是RNA病毒。 尚辅网 第一节 核酸的化学组成 一、概念 核酸（DNA或RNA）是核蛋白的组分之一，是许多核苷酸单位按一定顺序连接组成的多聚核苷酸，呈酸性。 二、分类与分布 根据组成不同，核酸可分为核糖核酸（RNA）和脱氧核糖核酸（DNA）。98%的DNA存在于细胞核中，2%存在于线粒体，90%的RNA分布在胞液，10%存在于细胞核。 三、核酸的化学组成 核酸有C、H、O、N、P等元素组成。其中磷的含量为9%～10%。核酸分子中磷的含量比较稳定，故可通过测定磷的含量来估算核酸的含量。 尚辅网 核酸，DNA或RNA，经核酸酶水解生成单核苷酸。 单核苷酸是组成核酸的基本单位。 核苷酸进一步分解生成碱基、核糖（或脱氧核糖）和磷酸。 核酸 低聚核苷酸 单核苷酸 磷酸 核苷 碱基 核糖 核酸的水解过程 （一） 核酸的结构组成单位 尚辅网 ? DNA RNA 嘌呤碱 腺嘌呤 腺嘌呤 鸟嘌呤 鸟嘌呤 嘧啶碱 胞嘧啶 胞嘧啶 胸腺嘧啶 尿嘧啶 戊糖 D-2′-脱氧核糖 D-核糖 酸 磷酸 磷酸 DNA分子和RNA分子中化学组成的差别总结 （二） 两类核酸的组成成分 尚辅网 1 .碱基(base) 核酸中的嘧啶碱