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鸡肝脏型脂肪酸结合蛋白基因启动子活性分析 高广亮1’2，冷丽“2，张会丰“2，贺綦1’2，李辉1’2’，王启贵1’p f1．东北农业大学农业部鸡遗传育种重点实验室；2．东北农业大学动物科学 技术学院，哈尔滨，150030；3．重庆市畜牧科学院，重庆，402460) 引言 acid L．FABP)作为脂类代谢的 鸡肝脏型脂肪酸结合蛋白(Liverfatty protein binding 重要候选基因，通过在细胞膜内结合并运输脂肪酸来发挥作用。鼠上的研究结果表明， 该基因与脂肪酸D氧化、VLDL的分泌等过程相关。目前该基因的功能在禽类并没有相关 报道。本研究通过对鸡L．FABP基因的启动子进行生物信息学分析，克隆、构建了该基因 启动子系列缺失报告基因载体，并对其活性进行检测，确定有基本转录活性的启动子区 域及转录因子C／EBP铡此基因启动子活性的影响，为鸡L．FABP基因表达调控的深入研 究奠定了基础。 材料方法 克隆所用菌株DH5a由本实验室保存；人肝癌细胞系(HEPG2)由东北农业大学生命 科学院馈赠；C／EBP濠达载体由本实验室构建保存。根据鸡L．FABP基因序列设计特异 素酶活性检测。C／EBPa真核表达载体(PCMV-HA载体作为阴性对照)与分别与不同长度 鸡L．FABP基因启动子报告基因载体共转染HEPG2细胞，48h后，进行荧光素酶活性检测。 启动子相对活性用目的基因荧光／海肾荧光值(Fluc／Rhc)比值表示。所有数据均为5次 独立实验结果，每次有3个平行实验，采用SPSSl3．0统计软件进行单因素方差分析与t检 验。 结果 本研究克隆并构建鸡L．FABP基因启动子系列缺失载体，通过检测报告基因的活性， 我们发现：(1)随着片段由5’端逐渐缩短，鸡L．FABP基因报告基因活性逐渐减弱；．2076# 动子区各片段均有负调控作用，且随着片段的逐渐缩短，C廊Pa对L．FABP基因抑制作 用逐渐减弱。 讨论 哺乳动物的L．FABP基因具有PPAR转录因子的结合位点，但在本研究中，生物信息 学分析结果显示，鸡L．FABP基因启动子区并不具有该转录因子的结合位点，推测鸡和人 的L．FABP基因在功能上有所不同，这可能是导致鸡与人和鼠等哺乳动物在脂肪从头合成 和脂肪酸运输过程中有差异的原因，但还需要生物学实验来进一步证明。CCAAT框在真 核生物启动子上主要分布在转录起始位点前．159／．51bp的区域内，根据在线软件分析鸡L． 的DNA结构域在人和鸡之间高度保守，氨基酸保守性也很高。本研究发现C佃PoL对L． FABP基因启动子区各片段均有负调控作用，且随着片段的逐渐缩短，C／EBPa对L． FABP基因抑制作用逐渐减弱。因此，推断这段区域内可能存在不止2个C／EBPa的结合位 点。本研究使用人的肝癌细胞系HEPG2作为实验材料，由于鸡和人的L．FABP基因和 CEBP／a基因在人和鸡的肝脏中都有表达且氨基酸序列的保守性很高，因此推测在人和鸡 的L．FABP基因具有相同的调控机制，即鸡L．FABP基因同样受到C／EBP伍基因负调控作 用。 关键词：鸡；肝脏型脂肪酸结合蛋白基因；启动子；活性分析 致谢：本研究受国家自然科学基金(No资助。 木通讯作者。