组织工程骨表面微观形貌和生物矿化的实验研究.pdfVIP

· 168 · 安徽医科大学学报 ActaUniversitatisMedicinalisAnhui2015Feb；50(2) 组织工程骨表面微观形貌和生物矿化的实验研究 宁寅宽，李 强，蔡伟 良，武成聪，陈佳滨，石正松 摘要 ’目的 用绿色荧光蛋 白(GFP)标记结合扫描电镜和 复提供新的治疗手段，种子细胞、支架材料和生长因 x射线能谱分析(SEM／EDS)技术对组织工程骨的表面微观 子是骨组织工程的3大要素，也是组织工程骨移植 形貌和生物矿化进行观测，以评价脱钙骨 (DBM)支架体外 到体内发挥功能的重要因素…。松质骨经过脱脂、 构建组织工程骨的生物性能。方法 用重组腺病毒介导 脱钙等处理后，内含有骨形态形成蛋 白生长 因 GFP基因转染兔骨髓间充质干细胞 (BMSCs)进行示踪标记 ， 子 ，与骨髓间充质干细胞 (bone-marrowmesenchy— 细胞与DBM复合经成骨诱导后 ，通过倒置荧光显微镜对细 malstemceils，BMSCs)复合可体外构建组织工程 胞生长情况进行即时观察，结合SEM／EDS技术 ，观测组织工 程骨的表面微观形貌和生物矿化。结果 在倒置荧光显微 骨。但是在构建组织工程骨及对其生物活性进行深 镜下见细胞在DBM支架上能较好的黏附、重叠生长和增殖， 入研究时，对 BMSCs在支架上的黏附、分布和生长 体外培养至 14d时，细胞 内GFP有较 高水平 瞬时表达。 情况无较理想的即时观测方法 J，对脱钙骨 (demi— SEM见DBM呈疏松多孔结构 ，孔隙直径为300～600 m，孔 neralizedbonematrix，DBM)体外构建组织工程骨的 隙率达90％。SEM下观察组织工程骨 ，见细胞在DBM网孔 表面矿化研究，国内外也鲜有报道 。该实验用重组 内表面贴壁生长，分泌基质旺盛，并可见粗糙 的生物矿化物 腺病毒介导绿色荧光蛋 白(greenfluorescentprotein， 覆盖支架。EDS显示其表面为钙、磷沉积物，其钙磷比(Ca／ GFP)基因转染兔 BMSCs进行示踪标记，结合扫描 P)为 1．46。结论 DBM体外构建组织工程骨有非常好的生 电镜和 x射线能谱分析 (scanningelectronmicro— 物性能 ，GFP标记结合 SEM／EDS技术可以作为DBM体外构 scopeandenergydispersivespectrometer，SEM／EDS) 建组织工程骨较好的评价手段。 技术，观测组织工程骨的微观形貌和生物矿化，以评 关键词 重组腺病毒 ；绿色荧光蛋白；骨髓间充质干细胞；脱 钙骨基质 ；能谱分析 价DBM体外构建组织工程骨的生物性能，为后期组 中图分类号 R687．34 织工程骨体 内植入实验奠定理论基础。 文献标志码 A 文章编号 1000—1492(2015)02—0168—05 1 材料与方法 骨组织工程概念的提出为骨组织缺损的再生修 1．1 实验材料 1．1．1 腺病毒载体 Ad．GFP表达载体由美国英潍 2014—09—30接收 捷基(上海)贸易有限公司构建、鉴定和提供。采用免 基金项 目：国家 自然科学基金资助项 目(编号