熊果酸对人肝癌HepG2、胃癌BGC-823与MGC-803细胞作用研究.pdfVIP

质粒的构建以焉，经过PCR和酶切鉴定，初步确定pMDC2EX中已经插入尽的基因，测 GSl 后形成pC2EX9K。pPIC9K和pC2EX9K分别电转置pastoris15螽，分别产生相应 G418的重组菌株R2EN。空 的转化予。甲醇利用型均为Mut+。获得抗浓度为2mg／ml 液，测定R2EN粗酶液中辣根过氧化物酶的活性，活性为56IU／L，而对照的C9K培养 液中未熊测到酶活性。酶的最适p}l失5，在中性溶液中酶活性会明显降低；最适温度 为25。C，不同于多数的37℃或更高，而且在4C这样较低的温度下，酶的活性也无明 显下降。取培养液上清的浓缩液进行SDS—PAGE分析，具有与辣根过氧化物酶e2大小 相符的蛋白条带，甲醇的终浓度为2％时培养液中目的蛋白的表达量最高。 结论：在毕赤酵母中宣接表达出了具有生物活性的辣根过氧纯物酶同功酶C2。 作者简介：邵金辉，博士，助理研究员，组织胚胎学及分予生物学专业，电予邮箱： brook356@yahoo。corn。cn 王涛邵敬伟郭养浩 (福州大学药物嫩物技术与m程研究所福州350002) 目的：熊果酸(ursolicacid，UA)又名乌苏酸，属于三萜类化合物，在自然界中 分布广泛，枇杷、芦笋、车翦革、自花蛇舌草、柿蒂、乌梅、女贞子等中草药均含有 UA。它具有广泛的生物学效应，如抗菌、抗溃疡、抗肝损伤、降血脂、抗氧化等作用， 丽其突感作用为抗肿瘤，抗肿瘤佟耀具有多方面和全方位等特点，具有巨大的临床应 用开发价值、显著的经济效益和社会效益。本研究路在采用现代研究手段阐明UA在 机理，为三萜酸阀系物抗癌药物的研发提供理论依据；以UA为先导物，筛选高效低 毒的抗癌药物，将提供自主知识产权成果，并为进～步研发高效低毒的三藉酸系列抗 癌药物打下坚实的基础；克服传统中药研究中的只注重临床药效学研究，忽视作用机 ·福建省科技厅青年人才创新项目(2007F0347)；福州大学SRTP(07102) ’ 3S 理研究的缺点，为实现中药现代化提供参考。 MGC-803细胞进行形态学观察，琼脂糖凝胶电泳观察DNAladder，进行分子水平考察， 流式细胞仪分析细胞周期及凋亡率，免疫化学法考察UA诱导人肝癌HepG2、胃癌BGC一 823及MGC-803细胞凋亡的机制。 时生长良好，表现为梭形或多角形，并可融合形成集落，加药后，细胞变圆、变小、 11 均不同程度的抑制和杀伤作用，MTT法测得用10—150mol／LUA作用人肝癌 la umol／L、85 HepG224h、48h、72h的ICso分别为110 mol／L、55pⅡnol／L，具有明显的 24h、48h、 浓度依赖性，但时间依赖性不明显；同样浓度的UA作用于胃癌BGC一823 IJmol／L、4312mol／L、30u 72h的IC50分别为60 mol／L，具有明显的浓度依赖性和时 mol／L、 间依赖性；同样浓度的UA作用于胃癌MGC-80324h、48h、72h的IC50分别为40u 35IJmol／L、25¨mol／L，在中低剂量时具有明显的浓度依赖性和时间依赖性，在高浓 度时，浓度依赖性不明显。荧光检测表明用药组的细胞可看到典型的细胞凋亡形态学 变化：细胞染色质浓缩，聚集于核边缘形成块状、环状或新月状，细胞体积缩小，核 固缩深染，部分裂解形成凋亡小体；