药用植物红豆杉根须的代谢轮廓分析.pdfVIP

◎ 药用植物化学与中药有效成分分析研讨会论文集(下) 药用植物红豆杉根须的代谢轮廓分析 葛广波，栾宏伟，胡莹，杨凌4 (中国科学院大连化学物理研究所药用资源开发组，大连116023) 摘要：红豆杉属植物是抗癌药物紫杉醇及其半合成前体的最主要来源，但其分布与含量具有显著的种 属及组织特异性．本研究针对红豆杉属植物复杂样品，建立了快速、灵敏的超高效液相．电喷雾．质谱 (UPLC．ESI．MS)轮廓分析方法。该方法分析时间短且对紫杉烷类化合物的检测限在O．05 ng到O．1ng 之间．通过选择合适的源内裂解能及优化质谱条件，可基于源内裂解产生的分子及碎片离子峰完成紫杉 烷类化合物的化学归属与亚结构分析。该方法被成功用于不同种属来源红豆杉根须样品的UPLC．ESI．MS 代谢轮廓分析。研究发现不同种属红豆杉根须具有近乎一致的化学组成，提示不同种属红豆杉根须具有 相似的次生代谢网络。从六种红豆杉根须提取物中共发现了50个化合物，包括1个芳香酸，1个类固醇， 1个多酚，3个木脂素及44个紫杉烷类化合物，基于模式化合物的质谱断裂规律从红豆杉根须中还发现 了5个新的紫杉烷类化合物。此外还发现红豆杉根须中富含紫杉醇、三尖杉宁碱及7．木糖．10-去乙酰紫 杉醇等含有IO-DAB母核的有用紫杉烷。 关键词：超高效液相色谱；电喷雾．质谱；红豆杉；源内裂解；代谢轮廓分析；紫杉烷 Metabolicofhair-rootsmedicinalTaxus profiling from plant 红豆杉属植物是抗癌药物紫杉醇的重要来源【l一。由于红豆杉属植物普遍生长缓慢，且紫杉醇含量 极其有限，紫杉醇日益增长的需求曾引发严重的来源危机13】。目前紫杉醇主要通过从可再生资源红豆杉 枝叶中提取前体化合物后半合成获得14】。紫杉醇及其前体化合物是红豆杉属植物的特征次生代谢产物， 但其分布及含量随种属及组织部位不同而存在巨大差异[5-71。因此对不同种属红豆杉及其各组织代谢物 的分析是红豆杉GAP种植及紫杉烷药物GMP高效生产的前提。此外，通过对红豆杉属植物的代谢轮廓 分析可了解紫杉烷的分布特征及累积规律，并有助于揭示紫杉烷类化合物在红豆杉体内的生物合成及调 控机制。 国内外研究已发现不同种属红豆杉枝叶的代谢物分布及其含量差异显著15-7]．但与之相对的是，红 豆杉其它组织部位的代谢物分布模式却很少有人关注。值得注意的是，红豆杉属植物根系发达【81，对根 须资源的理性开发可缓解紫杉烷的来源危机。因此对不同种属红豆杉根须的代谢物分析是非常必要的。 在过去十多年中，由于专属性强，灵敏度高及具有较强结构解析能力，LC．MS技术被认为是最适于复杂 样品中紫杉烷类化合物分析的技术【9d11。然而，红豆杉属植物化学成分极其复杂且多为微量成分，对其 进行代谢轮廓分析极具挑战性。近年来使用亚2／am填料的UPLC技术显示了良好的分离能力并大幅缩 短了分析时间，被广泛用于复杂样品的分析中【121，同时UPLC及其联用技术还显示了出色的灵敏度[131。 这些优点使得对红豆杉植物复杂样品中微量成分的快速分析成为可能． 1．实验部分 4通讯作者：杨凌，研究员，博士生导师．中国科学院。百人计划一入选者，大连化学物理研究所药用资源开发研究组组长． 181 药用植物化学与中药有效成分分析研讨会论文集(下) 1．1仪器与试剂 ’ Waters UPLCTM-TQD超高效液相色谱单重四极杆质谱联用仪配有二元溶剂管理器、在线脱气机、 4．1质谱工作站软件。 样品管理器、nⅣ紫外检测器、SQD检测器及MassLynx 乙腈为色谱纯，水为MiniQ超纯水，其余试剂均为分析纯。标准品(纯度猡8％)10．去乙酰巴卡亭 宁碱及lm去乙酰．7一木糖紫杉醇(10．D』Q∞)购自上海金和生物技术公司，纯度大于