鸡和鹌鹑W染色体Wpkci区段PCR特异性扩增研究.pdfVIP

480 lI生雪麴擅遗传直整噩窟盎屋 鸡和鹌鹑w染色体Wpkci区段PCR特异性扩增研究 廖和荥赵宗胜唐森森李大全 (石河子大学动物科技学院，新疆石河子，832003) 摘要将位于鸡w染色体上的高度重复序列(Wpkci基因)，利用聚合酶链式反应进行特异性扩 增．可以鉴定家禽的性别。本实验设计的两对引物，对鸡和鹌鹑的基因组DNA进行PCR扩增，然后用 10％丙烯酰胺凝胶电泳法，检测PCR产物，设定阴性和阳性对照，对鸡和鹌鹑w染色体上的高度重复 序列进行初步测定。结果引物1对鸡和鹌鹑都得到一条明显的特异性带，引物2虽然都得到特异性条 带．但鸡和鹌鹑表现出重复序列的位置不同。因而，推断鹌鹑在该序列处与鸡有明显差异，利用鹌鹑w 染色体上高度重复序列以进行性别鉴定应进一步的研究。 关键词鸡；鹌鹑；Wpkci区段；PCR技术 在过去的几十年里，对动物性别控制的研究，一直是人们关注的课题之一，但人们一直没有找到切 实可行的方法。随着分子生物学的研究进展，这一领域呈现出乐观的前景。哺乳动物性染色体上，有一 些X染色体上不具有的特异性序列，利用相对应的特异性引物对将该基因组DNA片段进行扩增，可以 较好的结果，一些国家利用PCR扩增奶牛和山羊胚胎的SRY基因序列鉴定早期胚胎性别，已获得成 功…。然而，目前对家禽性别决定机制尚未完全清楚，在禽类还没发现类似于Y染色体上的SRY片段， 后又证实其重复序列，使实际用于鸡胚的性别鉴定成为可能”1。本实验利用用于鸡性别鉴定的引物， 通过PCR扩增后，用10％丙烯酰胺凝胶电泳法检测PCR产物的方法，对位于鸡和鹌鹑w染色体上的 高度重复序列进行初步测定，从而为鹌鹑的性别鉴定研究奠定基础。 1材料与方法 1．1模板DNA样本的制备 1．1．1材料 分别采集10只成年鸡血液各lml，雌雄各半；采集10只成年鹌鹑血液各lml，亦雌雄各半，加入 EDTA抗凝后一200c保存。 1．1．2试剂 国产分析纯。 1．1．3DNA样本的制备 基因组DNA提取方法：本试验参考孟安明DNA酚氯仿抽提法，结合刘云芳等”1和燕海峰等”1的 方法，并经过改进。 1．2 PCR反应 1．2．1 PCR反应液的组成及PCR试剂的配置 PCR反应液的组成(体系为25山)10×PCR Primer：2m，Taq酶：2．5m，TDNA：1山。 塞盒盆王量煎撞苤塑壶洼i●鹅l 1．2．2引物对及反应程序 裹1引物的编号、序列、目的片段及来源 1．2．3扩增产物的检验 衰2 10％丙烯酰胺凝胶配置 30ral 60nd 30％丙烯酰胺 102ml 204m] H20 1359ml 2718ml 5×TBE 6ral 12ml TEMED 15止 30山 10％过硫酸铵 225m 450m 取3山的溴酚蓝指示剂与PCR产物混合后在铺好的丙烯酰胺凝胶上点样，电压为200V，电泳 4．5h，银染按常规方法进行。 2结果 从图1中可以看出，雄性样本都能在67bp处扩增到特异性的产物带，长度与设计预期的长度也吻 合，而雌性样本明显的没有带。同时图1也说明了引物1能够适合扩增出鸡w染色体上的高度重复序 列，因而，可以用做鸡的性别鉴定。从图5模式图所示，鸡的w染色体上拥有z染色体上不具有的特 异性重复序列Wpkei，引物1便是根据这一段特殊序列设计的，通过PCR扩增可得到特异性带，鉴定 鸡的性别。而图2中公鹌鹑和母鹌鹁都扩增出略高于67bp处得到一条明显的带，并且各泳道中不同程 度的出现多态性，而且多次改变PCR反应条件仍然重复任出现，说明在鹌鹁的性染色体该区域处出现 与鸡有