仔猪小肠黏膜下神经丛神经元类型日龄变化地研究.pdfVIP

仔猪小肠黏膜下神经丛神经元类型日龄变化的研究 赵琪张晗王瑞玲张原滕可导4 (中胃农业人学动物医学院北京海淀100094) 摘 要： 本研究采用组织化学和免疫组织化学方法对0，5、2 8日龄仔猪小肠黏膜下神经丛 中神经元类型的变化进行了定性研究和定量测定。结果表明，仟猪小肠黏膜下神经丛分为靠近 环肌层表面的BSP(external$ublIIUCOllS subnlucous Plexus)和靠近黏膜肌层的JSP(internal plexus)；ESP与ISP神经纤维的性质不同，ESP主要是有髓神经纤雏，而【SP主要是无髓神 经纤维；随着目龄增加，黏膜下神经丛发育较快，EsP与ISP的差异日益显著。本研究揭示： 仔猪出生后黏膜下神经丛在形态和不同亚群神经元比例上均有一调整期，其生理学意义可能是 使小肠黏膜下神经丛的功能日益完善。 关键词：黏膜下神经丛神经元小肠仔猪 Nervous 1921年Lanley提出肠道神经系统(EntericSystem，ENS)这一概念…。ENS 神经元通过交感和副交感传入和传出神经元与中枢神经系统相联系“3，形成既可以接受大 脑指令又可以处理局部信息的神经回路，因而能为胃肠道所有的功能提供神经控制”1。哺 乳期仔猪的腹泻问题给养猪业造成了巨大的经济损失。仔猪腹泻与其ENS发育不完善密切 相关。迄今国内、外学者已对人及多种动物黏膜下神经丛的形态、结构、神经元的性质等 方面做了初步研究，但尚未见定量研究仔猪黏膜下神经丛中神经元类型发育的报道。本研 究采用组织化学和免疫组织化学的方法对0、5、28日龄仔猪小肠黏膜下神经丛中神经元 的类型进行了定性研究和定量测定，旨在提供我国猪场猪种ENs发育状况的基础资料。 l材料和方法 1．1取材和标本制备0、5、28目龄组纯种英系大白猪每组各3头，经腋下放啦处死后， 分别取十二指肠、空肠前段和回肠，每段2份。用Kreb氏液充分冲洗，一份做冰冻切片， 一份用Bouin固定后制成4岫石蜡切片。 1．2 1．1删；NBT NADPfl-d组化染色、取小肠各段的冰冻切片滴加新配置的作用液(NhDPH X—100 pH7．3)，于37C暗处放置50min，染毕，甘油 0．6州：PBS0．1M；0．1％Triton 明胶封片。阴性对照：作用液中不加NADPH，其余实验条件相同。 取小肠各段的石蜡切片，按照免疫组化染色的常规 I．3NF、sP和S-100免疫组化染色 方法进行染色。采用热修复法进行抗原修复。阴性对照以PBS(O．01M，pH7，4)代替一抗， 其余实验条件相同。 ．155． 一抗来源一览表 一抗 来源 小鼠抗人NF单克隆抗体 美国ZDIED公司(购自北京中山公司) 兔抗人sP单克隆抗体 美国ZYMED公司(购自北京宝芝林生物技术公司) 兔抗人S-100多克隆抗体美国zYMED公司(购自jE京中山公司) 1．4不同类型神经元的形态观察与计数 分别对常规染色(HE)、组化染色(NADPH)、 免疫组化染色(NF、SP、S-100)的小肠横切片的肌问神经丛进行形态学观察：并取NADPH、 进行统计学分析。 2结果 2．1仔猪小肠黏膜下神经丛发育的形态学观察 仔猪小肠黏膜下神经丛内NADPH阳性神经元(图1)数目较少，体积也相对较小。采 用免疫组化染色能够较好地显示黏膜下神经丛的结构。黏膜下神经丛中含有丰富的NF、 示出黏膜下神经丛在解剖位置上分为近环肌层和近黏膜肌层两部分，即外黏膜下丛(E