运送禽流感病毒DNA疫苗地重组减毒沙门氏菌地实验室免疫效力研究.pdfVIP

禽类传染病 运送禽流感病毒DNA疫苗的重组减毒沙门氏菌的 实验室免疫效力研究 唐丽华，潘志明，程宁宁，张晓明，黄金林，胡青海，焦新安· 、 (扬州大学生物科学与技术学院，江苏扬州225009) 摘 要：将带H5Nl型禽流感病毒HA基因的重组减毒鼠伤寒沙门氏菌SL7207(pVAXl—HA)、 分别以5x109CFU的剂量两次口服免疫4日龄商品代伊莎褐蛋鸡。二免后3周，试验鸡用禽流感病毒JSGO (H5N1)进行攻击．二免后三周称重实验显示，重组沙门氏菌免疫组与对照组间没有显著性差异 (P0．05)。测定首免后2周和二免后3周血清抗体效价以及二免后3周小肠黏膜抗体效价，结果显示， 组、SL7207*(pcDNA3．1．H舢免疫组都能激发机体产生黏膜免疫应答，且与空载体组、空白对照组以及油 增强DNA疫苗的免疫效果．本研究为进一步优化基于黏膜免疫途径的新型禽流感基因工程粘膜疫苗奠定 了基础． 关键词：减毒沙门氏菌；禽流感病毒；DNA疫苗 avianinfluenza，HPAl)是由正粘病毒科A型流感 高致病性禽流感(highlypathogenic 病毒引起的一类禽类病毒性传染病，是国际兽疫局(olE)确定的A类疾病。自禽流感于 1878年在意大利首次发现后，在欧洲、美洲、北非、东南皿、中东和俄罗斯等地也相继发 生，造成了巨人的经济损失…。尤其是近年米，H5NlHPAI在世界多个国家的频繁暴发，给 养禽业带来巨大的威胁，同时出现人类的感染、死亡病例，该病引起全球的广泛关注。 目前，我国市场上_)=}j于禽流感免疫预防的疫苗主要是油乳剂全病毒灭活疫苗，效果确实， 在禽流感的防治中发挥了巨大的作用，但是灭活苗也存在一些缺陷，如存在散毒的潜在危险、 不能有效激发细胞和黏膜免疫应谷等，冈此有必要研究一种新型疫苗克服以上不足。研究表 明，利刚减毒沙门氏茵载体运送DNA疫苗，具有同时激发机体产生细胞免疫、体液免疫和 黏膜免疫应答，并可获得对载体菌的免疫等优点12一j。但如何进一步提高载体茵的运送效率， 提高DNA疫苗的免疫效果一直是研究这种新型疫苗的热点 之一。基丁．此，本试验选用了可以直接运送质粒进入细胞胞液的减毒鼠伤寒沙门氏菌 SL7207册。突变株SL7207’，并且在重组质粒的构建过程中引入CpG序列，构建出携带有 H5NI皿型禽流感病毒血凝素HA基因的DNA疫苗的减毒鼠伤寒沙门氏菡侯选株，本文就 这些重组减毒沙门氏茵进行安全性利免疫效力评价，为进一步研制出基于黏膜免疫途径的新 型禽流感基因：[程疫苗奠定基础。 1材料与方法 1．1重组沙门氏菌、毒株、质粒、试验动物 核表达质粒pcDNA3．1．HA的减毒鼠伤寒沙门氏菌SL7207s／fA基因突变株SL7207’(pcDNA 3．1．HA)由本室构建保存：商晶化油乳剂灭活疫苗购自中牧实业股份有限公司；攻毒用禽流 感毒株JSGO(H5NI)由农业部畜禽传染病学重点开放实验室保存；1日龄商品代伊莎褐蛋 鸡购自江苏省无锡市养鸡场集团公司。 l。2重组菌的免疫效力试验 1．2．1试验分组及免疫接种 394 第六届理事会第二次会议暨教学专业委员会2006年会议论文集 1．HA)免疫组、空向对照组祠I油苗免疫组。细菌免疫组均以5×109CFU／羽的剂量免疫，空 白对照组以0．2mlPBS／羽替代，以口服方式免疫二次，分别予4、18日龄进行，油苗组予4 日龄颈部皮’卜．接种商晶化油乳剂灭活疫苗0．2ml／羽。 1．2．2试验鸡称重及样品采集 分别丁．第4天和第39天称量各试验组所有鸡的体重，观察其增重情况。各免疫组分别 于首免后14、35天采血分离血清，10羽／组。在首免后第35天每组剖杀5只试验鸡，制备 肠道黏膜样晶14J。 1．2．3 HA蛋白特异性血清和小肠黏膜抗体效价测定 HA蛋白特异性血清效价的测定按照OIE标准进行，小肠黏膜抗体效价测定通过间接 ELISA方法151进行，测定结果川SPSSll．5软件进行统计分析。 1．2．4攻毒 于二免后3周，试验鸡川禽流感病毒JSGO(H5N1)以滴鼻和口服途径进行攻击，攻 毒