再生丝素固定化乙酰胆碱酯酶传感器检测农药地研究.pdfVIP

第三届全国环境化学学术大会论文集 A-24 再生丝素固定化乙酰胆碱酯酶传感器检测农药的研究 刘润 康天放 鲁理平 北京工业大学环境与能源工程学院，北京 100022 关键词：生物传感器，农药，乙酰胆碱酯酶，再生丝素 分类：环境分析化学/监测新技术方法 1 引言 基于有机磷或氨基甲酸酯农药对乙酰胆碱酯酶(AChE) 的抑制作用而建立的这两类农 药的分析方法具有简便、快速、廉价等优点，受到了人们广泛关注。采用丝素作为酶的固 定化材料，其优点在于丝素蛋白与酶蛋白之间有良好的相容性,既可较好的固定酶,又可使酶 保持较高的活性。氧化乐果和克百威分别属于有机磷农药和氨基甲酸酯农药，本文以7，7， 8，8-四氰基醌二甲烷（TCNQ ）为电化学催化剂，通过戊二醛交联的方法将AChE 固定在 再生丝素粉末上，将以上混合物固定于碳糊电极，制备成用于氧化乐果和克百威检测的生 物传感器，并且对该生物传感器制备条件进行了优化。 2 实验部分 所有的电化学实验均在CHI660A 电化学分析仪 (上海辰华仪器公司)上进行，实验采用 三电极系统，以生物传感器作为工作电极，饱和甘汞电极（SCE）为参比电极，铂片电极为 对电极。乙酰胆碱酯酶（EC3.1.1.7 ，typeⅢ，Sigma 公司），石墨粉(光谱纯，国药集团化学 试剂有限公司) ，40%氧化乐果乳油（河北新兴化工有限公司），克百威，含量超过99.5%， （中国农业部农药检定所提供），农药浓度根据所标示的有效成分计算。其它试剂均为分析 纯。 根据文献[1，2]方法制备再生丝素。按照环氧树脂：邻苯二甲酸二辛酯：乙二胺＝100： 15：7 （重量比）混合均匀，制得所需要的粘合剂。将石墨粉、TCNQ和固定了酶的再生丝 素粉末按重量比为8：1：1的比例混合均匀，加入适量粘合剂后，填入内径为6 mm的PVC管 中，引出一根铜棒作为电导体，将制得的生物传感器表面在金相砂纸上磨平，备用。 将三电极浸入pH7.5 的0.1mol/L 磷酸盐缓冲溶液（PBS ）中，让背景电流衰减到稳态 值后，加入 100μL 浓度为0.05mol/L 的乙酰硫代胆碱溶液，使底物浓度达到5.0×10-4mol/L ， 搅拌 10min，在静止的溶液中记录所产生的稳态电流 iss1 。在另一份磷酸盐缓冲溶液中加入 一定浓度的农药，温育 15min 后，加入同样浓度的乙酰硫代胆碱溶液，测量稳态电流iss2 。 根据下式计算百分抑制率（I% ）:[3] i −i I % ss1 ss2 ×100% i ss1 3 结果与讨论 3.1 生物传感器对农药的响应 以乙酰硫代胆碱作为底物，在AChE 的催化水解作用下，生成的巯基胆碱在电极表面 氧化产生电解电流，随着溶液中农药浓度的增加，AChE 受到抑制的程度也相应增大，生 成的巯基胆碱的量随之减少，电解电流也相应减小。因此，可通过测量电流信号的衰减程 度来测定农药的浓度。 图1 是生物传感器在底物溶液和含有氧化乐果的底物溶液中的循环伏安图。由图可知， 工作电极在乙酰硫代胆碱溶液中的电流明显大于空白溶液电流，这是AChE 催化作用的结 果。当农药存在时，酶的活性受到抑制，因此电流减小。 I-43 第三届全国环境化学学术大会论文集 + + CH COS(CH ) N (CH ) + H O HS(CH ) N (CH ) + CH COOH 3 2 2 3 3 2 2 2 3 3 3 HS(CH + + ) N (CH ) [ S(CH ) N(CH ) ] + 2