胰岛素基因转染的人脐带间充质干细胞和丝素蛋白支架构建组织工程脂肪的研究.pdfVIP

胰岛素基因转染的人脐带间充质干细胞与丝素蛋白支架构建 组织工程脂肪的研究 唐军 刘毅 徐斌 兰州军区兰州总医院全军烧伤整形外科中心 人脐带间充质干细胞 （humanumbilicalcordmesenchymalstemcells，hUCMSCs）可在体外分离、扩增培 养，经诱导分化为脂肪细胞，是新的脂肪组织工程种子细胞[1]。蚕丝蛋白是天然的生物支架材料，具有 良好的机械特性和生物相容性、生物降解性，且来源丰富，价格低廉，它作为组织工程支架材料具有很 大潜力[2-4]。hUCMSCs在成脂诱导剂作用下可分化为脂肪细胞，诱导剂的重要成分为胰岛素。本研究将 携带重组人胰岛素基因慢病毒载体转染hUCMSCs接种于丝素蛋白支架，旨在探求体外有效构建组织工 程化脂肪的方法。 导，L口Y再秣月日形 目转染对hUC }．为转染组和 an，1T，n‘±： 蛋白支架内已 显增加，约为 3组 hUCMS( 习胞没有表达 B组 :4A~ ~fadipogeni~ GroupB:4: II，用于异体移 因导入和表达， 化、增殖为脂肪 ]。本实验将携带 孚携带重组人胰 9 hUCMSCs主 为 下一步在体 携带胰岛素基因的人脐带间充质干细胞与丝素蛋白构建 组织工程脂肪的移植研究 刘毅 唐军 徐斌 兰州军区兰州总医院全军烧伤整形外科中心 甘肃兰州730050 [摘要]目的 探讨携带重组人胰岛素(insulin)基因慢病毒载体转染的人脐带间充质干细胞(human umbilicalcordmesenchymalstemcells，hUCMSCs)与丝素蛋白复合后在Wistar大鼠体内构建组织工程脂 肪的能力。 方法 分离培养hUCMSCs，将携带重组人胰岛素基因慢病毒载体以最适MOI=10转染 hUCMSCs，将转染组与未转染基因的hUCMSCs（对照组）分别接种于丝素蛋白支架，在体外含10％ FBS 的LG-DMEM培养基中孵育1-2d，在成脂诱导剂中孵育5-7d后，移植于Wistar大鼠背部皮下。移植后 12周取材，行荧光原位杂交技术鉴定与组织形态学和扫描电镜观察。结果 1.两组新生组织油红O染色 均呈阳性，证明新生组织为脂肪组织，且转染组脂肪样细胞数量明显高于对照组，有显著性统计学差异 (P＜0.01)。2.HE染色显示，两组新生组织结构与正常脂肪组织相似，组织内及其周围可见明显新生血管， 未降解支架材料周围有炎性细胞浸润；转染组支架材料降解明显，炎性细胞浸润明显少于对照组，新生 血管数量也多于对照组。3.扫描电镜观察，两组新生组织内可见脂肪样细胞和新生血管，转染组新生组 织内脂肪样细胞聚集成团，其结构与正常脂肪组织相似；对照组脂肪样细胞则散在分布于支架孔隙内。 结论 携带重组人胰岛素基因慢病毒载体转染的hUCMSCs与丝素蛋白支架复合后，在Wistar大鼠体内 能构建出组织工程化脂肪组织，其结构类似正常脂肪组织。 [关键词]组织工程脂肪；人脐带间充质干细胞；丝素蛋白；胰岛素；基因转染；慢病毒载体；移 植