生物除锰滤池自养菌的分离与鉴定.pdfVIP

第09卷 第4期 中国水运 VoI．9 No．4 2009年 (湘inaWater I 2009 4月 Transport Apri 生物除锰滤池自养菌的分离与鉴定 熊晓丽，杨 宏，唐美丽，甘文娟，曹自伦，张 粲 (北京工业大学北京市水质科学与水环境恢复工程重点试验室。北京100124) 摘要：地下水生物除锰过程中存在着一个复杂的微生物群系，自养菌是其中不容忽视的重要组成部分。用含有Fe2+、 Mn2+的无机培养基，利用传统的细菌分离方法．从试验室地下水生物除锰滤池中分离、纯化出20多株细菌，经LBB 6个种。 关键词：生物除锰；自养菌；Sherlock细菌鉴定系统；地下水 中图分类号：x523 文献标识码：^ 文章编号：1006—7973(2009)04一0265-02 地下水生物除锰技术以其处理效果好、运行状况稳定， 棒搅拌后，振荡5mjn，再用研磨器研磨数次，将滤砂表面 投资费用少等特点，受到了国内外研究者的日益关注11l。生 的铁、锰氧化细菌剥落，制成高浓度的茵悬液。然后，将振 物除锰工艺在我国已经得到较为广泛的研究和应用12{l，但对 荡后得到的悬浊液倍比稀释成不同的稀释度10‘2—10一。 其中微生物的生理特性、氧化机理的研究一直不够深入，这 细菌的分离纯化：从稀释后的菌悬液吸取lmL平布到平 在一定程度上阻碍了该J=艺的进一步完善。生物除锰滤池的 面培养基上，在25℃培养。待平面培养皿内的茵落出现后， 主要微生物是Mn(II)氧化细菌，Mn(II)氧化细菌广泛选取菌落数量多且分布均匀的培养皿，挑取其上不同的典型 存在于自然界中11l，因此对地下水生物除锰滤池里细菌进行 茵落，进行平板划线，多次分离纯化，结合镜检。 分离纯化，鉴定其属种类别，探讨其生物特性，对生物除铁 (2)具有氧化活性菌种的筛选 除锰机理的探究及除锰工艺的更进一步应用具有重大意义。 高价Mn的测定采用LBB(1eucoberbelinblue)法 一、材料与方法 ． 1．材料 由于培养基中含有Mn2+，经过数天培养，具有氧化能力的细 (1)仪器设备 菌能将其氧化为高价Mn。用接种环在固体培养基上刮取少 sanyo全恒温培养箱；安捷伦6890N气相色谱仪、MIDI量菌落于试管中，滴加LBB试剂，显现蓝色就表明有高价 Sherlock细菌鉴定系统；旋转式混合振荡仪；水浴锅；10m1Mn生成，即细菌具有Mn2+氧化能力。 带聚四氟乙烯塞的玻璃瓶等。所有的玻璃器皿均需在马福炉 (3)细菌鉴定 巾400℃烘烤1h。 试验方法主要参照MIDI操作手册19I，即在培养基上28 (2)菌种来源 ℃恒温培养细菌24h后取菌，通过提取和分离细菌细胞膜中 实验窒运行的地下水生物除铁除锰滤池滤砂。 的磷脂脂肪酸(PLFA)，甲基化后进行气相色谱鉴定分析， (3)培养基 与系统库中的短链脂肪酸图谱进行对比，鉴定出细菌的属和 分离培养基一MnS04H200．29，l(2HP04O．19， 种。 分析：吸取上层有机相于GC样品瓶中，在安捷伦6 Mgso‘·7H200．29，NaN03O．29。CaCl20．19，(NH) 2c030．19，NaHC030．19，FeS04·7H20O．059，去离子 890N气相色谱测定。检测器为氢火焰离子检测器(FID)， 水1000ml，溺pH6．8—7．2，加琼脂1．5％。在121℃高压色谱柱为：Agilent 灭菌15min。在无菌环境中，将灭菌后的培养基倒入平面培 养皿，制成固体平面培养基。为防止MnS04·H20