“益气调血，扶本培元”组穴对MID模型大鼠脑线粒体呼吸链氧化磷酸化功能与影响.pdfVIP

“益气调血，扶本培元”组穴对MID 模型大鼠脑线粒体呼吸链氧化 磷酸化功能的影响 吴帮启 刘存志 于建春 韩景献 天津中医药大学第一附属医院针灸研究所 目的：随着人类老龄化社会的到来，血管性痴呆发病率日益增加，运用缺血性痴呆模型 大鼠对其进行深入的机理研究具有重要意义。用 Clark 氧电极法对脑组织线粒体呼吸链上复 合酶Ⅰ、Ⅱ、Ⅳ及Ⅲ态﹑Ⅳ态呼吸进行测定。方法：建立 MID 模型大鼠，采用益气调血，扶 本培元组穴，对其进行针刺21 天后，对线粒体呼吸链上复合酶及Ⅲ态﹑Ⅳ态呼吸的影响，探 讨“益气调血，扶本培元”组穴对血管性痴呆模型大鼠脑线粒体功能改善的机制。结果 1.实 验大鼠皮层线粒体Ⅲ态呼吸，模型组明显低于正常组，针刺组高于模型组；2.实验大鼠皮层 Ⅳ态呼吸，模型组高于正常组，针刺组低于模型组；3.实验大鼠皮层线粒体呼吸链上复合酶 Ⅰ，模型组低于正常组；针刺组高于模型组；4.实验大鼠皮层线粒体呼吸链上复合酶Ⅱ，模 型组低于正常组；5.实验大鼠皮层线粒体呼吸链上复合酶Ⅳ，模型组低于正常组；针刺组高 于模型组；6.实验大鼠海马state 3(Ⅲ态呼吸)，模型组低于正常组，针刺组与非穴组均高于 模型组；7.实验大鼠海马state 4(Ⅳ态呼吸)，模型组高于正常组，针刺组低于模型组。相同 样本量的皮层和海马线粒体state 3、state 4 各实验组对应相比，均无统计学意义；8.皮层、 海马线粒体呼吸控制率（RCR）：模型组低于正常组，针刺组高于模型组。海马线粒体 RCR 与 皮层线粒体 RCR 各实验组对应相比：正常组与假手术组海马 RCR 高于皮层组，而模型组、针 刺组与非穴组海马RCR 却低于皮层组RCR，但仅正常组具有显著性差异，其余各组均无统计学 意义；9.实验大鼠皮层、海马磷氧比（P/O）：模型组低于正常组，针刺组高于模型组。皮层 与海马各实验组对应相比均无统计学意义；10.实验大鼠皮层、海马氧化磷酸化效率(OPR)： 模型组低于正常组，针刺组高于模型组。皮层与海马各实验组对应相比均无统计学意义。结 论 “益气调血，扶本培元”组穴能够改善MID 模型大鼠脑组织线粒体Ⅲ、Ⅳ态呼吸，促进氧 化磷酸化，主要通过NADH 途径对复合酶Ⅰ、Ⅳ的调节。 1 实验方法 1．1 动物分组 每批实验用Wistar 雄性大鼠 80 只，体重280±20g，室温20-25℃饲养，室内采光按照 白昼循环模式，定时喂食，自由饮水，预养15 天后，随机分为预用栓子造模组 60 只、正常 组和假手术组各 10 只，栓子造模组在经过Morris 水迷宫筛选出痴呆鼠后，又将痴呆鼠分为 模型组、针刺组和非穴组（每组10 只）；以上动物来源均由中国科学院放射研究所提供。 116 1.2 模型的制作方法 参考kaneko[1], 陈俊抛[2]方法加以改进。取同种大鼠股动脉采血，无菌条件下于37℃ 温箱内自然干燥24 小时，用100 目筛子过筛，制备200 μm 以下的血凝块备用。应用时每10mg 血栓加 0.3ml 生理盐水制成混悬液。3.5%水合氯醛按 35mg/100g 体重腹腔麻醉。颈正中切开 皮肤（约 1cm），剥离胸骨舌骨肌、肩胛舌骨肌与胸骨乳突肌，暴露颈外动脉，分离颈外动脉 上两分支，避开两分支，分别在颈外动脉上备 2 根手术缝合线，结扎远心端，近心端先套一 1 活结。用儿科 4 号头皮针针头逆行穿刺右颈外动脉至右颈内动脉起始处，随即用 1ml 注射 2 器缓慢（约 60～90 S）注入栓子盐水悬液 0.3ml，使栓子通过颈内动脉进入颅内至大脑各动 脉，造成多灶性脑梗塞，然后结扎颈外动脉，缝合皮肤。切口处滴注庆大霉素抗感染。假手 术组手术方法同模型制作，只是注射时以生理盐水0.3ml 代替栓子溶液。 1.3 Morris 水迷宫实验(Morris water maze test) 参考有关文献进行Morris 水迷宫[3-4]实验。各组动物于造模后7d 进行隐蔽平台试验， 连续训练 5d。取第 5d 正常组大鼠逃避潜伏期的均值为参考值，同时计算栓子造模组大鼠第 5d 的平均逃避潜伏期与参考值之差占该鼠的平均逃避潜伏期时间的比值，该值＞20%定为痴呆 鼠。结果50 只栓子造模组大鼠中有35±2 只入选，剔除不符