人α-乳清蛋白基因乳腺表达载体的构建.pdfVIP

抗病遗传育种与繁殖技术专题 295 o T020018 人Q一乳清蛋白基因乳腺表达载体的构建章 沈一飞 党文庆王颖李艳玲蒋晓玲徐宁迎” (浙江大学的动物科学学院，浙江杭州 310058) 引言 营养成分，并且研究证明Q一乳清蛋白有一定的杀菌和增强免疫力的作用。 规模猪场初生仔猪所面临的主要问题是出牛时体重较小，断奶前死亡率高，体内抗体水平不足，免 疫抗病能力低下等。仔猪初生时唯一的营养来源是母乳，凶此提高母乳品质是解决仔猪自身体质较弱， 提高免疫力的有效方法。有报道称转Q一乳清蛋白猪的哺乳母猪有着高含量的a．乳清蛋白及乳糖，同时 其产奶量也提高了20％～50％，从而使断奶仔猪的断奶重和存活率得到硅著提高。本研究希望通过将人 Q一乳清蛋白转入猪中，从而培育具有我国自主知谚{产权的转人Q一乳清蚩白基因猪新品种。制备转人Q 一乳清蛋白猪的第一步就是构建人q．乳清蛋白乳腺衷达载体。 材料方法 酶切位点，故在引物中加入了XhoI酶切位点和保护碱基。然后利用PCR技术克隆出目的片段，并进行 检验，阳性质粒提纯后进行测序检验。把连接有人Q一乳清蛋白基因的质粒终．XhoI和PvuI双酶切后， I单酶切，并且去磷酸化，然后离心柱纯化刚收。人Q．乳清蛋白 割胶回收日的片段。pBCl质粒用Xho Q人肠杆菌，挑单菌落培养，设计 基冈和单酶切后pBCl质粒按照10：1的比例混合进行连接，转入DH5 特异性引物，PCR检验目的片段的正反连，最后测序检验。 结果／讨论 I单酶切得到了 最终成功获得了插入人Q一乳清蛋白基因的pBCl重组质粒(pBCl．LA)，经过泐D 21．628 增片段，即为目的片段正向连接的载体。最终经测序分析所构建的载体结构完全正确。本实验中使用的 pBCl载体是一种乳腺特异性表达载体，从而可以避免对转基囚动物其它组织的影响。pBCl．LA的成功 构建为下一步的细胞表达，动物实验并最终研制转人Q乳清蛋白猪奠定了基础。 参考文献 GT,Donovan alterationofSOWmilktO and 【l】WheelerMB，Bleck growth SM．Transgenic improvepiglet health[J]．Reprod Suppl．2001，58：313·324． 【2】于晓明，樊飞跃，安靓．人乳铁蛋白乳腺真核表达载体pBCl．hLF的构建【D】．中围协和医科大学．2003． 【3】孟立，张艳丽，许欣，千子玉，闫益波，庞训胜，钟部帅，黄荣，宋洋，王金玉，千锋．人乳铁蛋(JcDNA基因乳腺表达载体的构建 与鉴定【J1．生物上程学报．2011，27(2)：253．261． ‘资助课题：国家重大专项资助(编号：2009ZX08006-009B)。 。’通讯作者