应用alc基因开关在糙皮侧耳中表达绿色荧光蛋白.pdfVIP

应用alc基因开关在糙皮侧耳中表达绿色荧光蛋白 赵帅举王景冒 左勇涛戚元成 申进文 邱立友+ 河南农业大学生命科学学院，农业部农业微生物酶工程重点实验室，郑州450002 nidulans alc基因开关是利用乙醇灵敏、精确和安全地调控基因表达系统，广泛用于丝状真菌和 摘要：构巢曲霉Aspergillus ostreatusPCI5 植物基因的调节表达，但在担子菌中尚未见报道。从糙皮侧耳Pleurotus v2．0基因组数据库中电子克隆得到 其假拟乙醇脱氢酶基因(alcA)及其上游序列，该基因上游1317bp序列中含有1个正向和2个反向AlcR蛋白的特异性结合 转化子在含有葡萄糖的培养基中没有绿色荧光蛋白表达，在含有乙醇的培养基中则有绿色荧光蛋白表达。结果表明，糙皮 侧耳利用乙醇的代谢调控机制与构巢曲霉相似，仅用alcA基因启动子替代目的基因的启动子即可有效调控基因的表达。 关键词：糙皮侧耳，基因开关，诱导表达，乙醇脱氢酶 Greenfluorescent controlled proteinexpressionbyalc--gene ■o—o ■● ■ J SWItCnlnPieU，‘oCUSoS ZHAO Li—You’ Shuai—Ju，WANG Jing-Mao，ZUOYong-Tao，QIYuan—Cheng，SHENJin—Wen，QiU ofLifeSciences，Henan Laboratory College AgriculturalUniversity,KeyofEnzymeEngineeringofAgricultural of Agriculture,450002。China Abstract：Theethanol—inducibleswitchfrom isa alc-gene nidulans andsafe Aspergillus sensitive，precise for hasbeen usedto infilamentous regulationsystemgeneexpression，whichwidely regulategeneexpression and switchhadnotbeen tobeusedin this fungiplants．However,thealc-gene reported Basidiomycetes．Instudy, wediscoveredthe alcohol its inPleurotus hypotheticaldehydrogenasegene(alcA)andupstreamsequences ostreatusPC15v2．0 electronicfromits database．Therewere genomeby cloning genome oneforwardandtwo reverseAlcR site inthe 1317 1-PalcA specific bindingsequencesupstreamsequencebp．TheplasmidpEGFP—C wasconstructedfrom 1 the of