四妙勇安汤对缺氧人脐静脉内皮细胞的影响_临床医学论文.docVIP

四妙勇安汤对缺氧人脐静脉内皮细胞的影响_临床医学论文 四妙勇安汤对缺氧人脐静脉内皮细胞的影响_临床医学论文 作者：刘真,魏运湘,于慧卿,马秀娟,王强,李武卫,李永新 【摘要】 目的 观察四妙勇安汤对体外培养的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)缺氧损伤模型的影响。方法 实验分为3组,即正常组、模型组、四妙勇安汤组,后2组建立体外细胞缺氧模型,用四甲基偶氮唑蓝(MTT)实验观察四妙勇安汤对缺氧内皮细胞存活率的影响,测定四妙勇安汤对缺氧内皮细胞乳酸脱氢酶(LDH)漏出量的影响,并用免疫荧光法检测细胞中血管内皮生长因子(VEGF)生成量的表达。结果 四妙勇安汤能显著增加MTT实验中各孔吸光度值,降低LDH漏出量,增加VEGF的生成量。结论 四妙勇安汤具有保护缺氧的HUVEC损伤的作用,其作用机制与增加细胞活性、降低缺氧造成的细胞毒性、增加VEGF的表达、促进血管新生的作用有关。 【关键词】 四妙勇安汤;缺氧;人脐静脉内皮细胞;血管新生 　　Abstract：Objective To study the effect of Simiaoyongantang on human umbilical vein endothelial cells (HUVECs) injury induced by hypoxia. Methods The HUVECs were divided into normal group, model group and Simiaoyongantang group, and the hypoxia model was established at the latter two groups. The livability of HUVECs was measured by MTT assay. The transudation of LDH in the medium was measured by biochemistry and the positive expression of VEGF was detected by immunofuorescence chemistry. Results The level of LDH was reduced significantly and the cell activity indicated by MTT was increased. The number of the cells stained by VEGF increased in the treatment group of Simiaoyongantang. Conclution Simiaoyongantang has protective effect on hypoxia injured HUVECs, which may be related to its effect of increasing the cells livability, reducing the injury induced by hypoxia, up-regulating expressions of VEGF and promoting angiogenesis. 　　Key words：Simiaoyongantang;hypoxia;human umbilical vein endothelial cells;angiogenesis 　　自从Hockel等[1]提出了“治疗性血管生成”的概念后,以促血管生长因子诱导心脑血管组织新生血管形成,已成为治疗性血管新生研究中最为活跃的领域。组织缺血缺氧后首先受到影响的是内皮细胞,因此,对内皮细胞的研究成为了研究缺血缺氧性疾病的重要手段。人脐静脉为体外获得内皮细胞的重要来源,故选用人脐静脉内皮细胞(HUVEC)作为实验对象。现代药理研究表明,四妙勇安汤能够扩张血管,疏通及促进血液循环,使未闭塞的动脉及侧枝循环变粗、增多,已经广泛应用于治疗血栓闭塞性脉管炎。近年来研究表明,此方对心血管疾患疗效确切[2]。本实验从细胞活性、乳酸脱氢酶(LDH)漏出量、血管内皮生长因子(VEGF)生成量3个方面观察了四妙勇安汤对缺氧HUVEC的影响。 　　1 实验材料 　　1.1 试剂 　　1640干粉(Gibco公司),明胶(Sigma公司),胎牛血清(杭州四季青公司),100 U/mL青霉素、80 ?g/mL链霉素(华北制药),胰蛋白酶(Amersco公司),四乙酸乙二胺-二钠(disodium edetate,EDTA),Earle液(河北医科大学),兔抗人Ⅷ因子相关抗原(bs-0332R,北京博奥森生物公司),VEGF(北京博奥森生物公司),异硫氢酸荧光素(fluorescein is