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单细胞成像观测研究 袁倬斌+，李瑁，张君 (中科院研究生院应化所．北京．100039) 细胞是动植物结构和功能的基本单位，生命活动都是在细胞内实现的，细胞的新陈代谢、 呼吸作用、光合作用都与细胞的整体状况有关：发育生长是从几个细胞开始的；癌症也是与 细胞病变有关。干细胞是一类具有自我更新和分化潜能的细胞．包括胚胎干细胞和成体干细 胞。按分化能力的大小，干细胞可以分为全能型和专门型。全能型干细胞，具有形成完整个 体的分化潜能，如胚胎干细胞；专门型千细胞，只能向一种类型或密切相关的两种类型的细 胞分化。目前人类胚胎干细胞已可成功地在体外培养。干细胞生物工程是通过对干细胞在体 外进行定向诱导或基因修饰．变成所需要的功能细胞，然后移植到人体内，替换坏死的细胞， 从而修复病变的组织以治疗疾病。因而，对单个细胞进行成像观测，有可能解决细胞功能、 细胞个体与群体的生理行为、细胞变异及细胞通讯的生物化学、化学生物学和医学等悬而未 决的问题。 现代分析化学中对单细胞分析较热门的流式细胞术和膜片钳技术虽然分别能对细胞进行 定量和定性，但对单细胞进行成像观测则没有优势。显微技术是细胞学中最基础的研究手段 之一，包括直接成像和间接成像。而对单细胞直接进行成像观测研究能形象地对其形貌、大 小、表面粗糙度等进行生动直观的检测，扫描隧道显微镜(SN)、原子力显微镜(AFM)、扫 描电化学显微镜(sECM)等扫描探针显微镜(sPM)的发明“”及其在生命科学研究领域的广泛 应用后。在准天然条件和接近生理环境的条件下，单细胞的成像观测才得以实现。单细胞和 单分子的分析进展的研究我们在以前已有文章发表”~51，近期单细胞成像的研究又有新发展嗡” 本文专门对单细胞的成像观测作进一步的报道。 1665年，英国科学家罗伯特唬克用显微镜观察到人肉眼看不见的细胞，1931年，M．Knoll 显微镜(SEM)。由于电子的速度可以加到很高．电子显微镜的分辨率可以达到微米级，能进 一步看到细胞内部的结构。 隧道显微镜(s1M)，观察到纳米层次。其工作原理是基于量子力学的隧道效应，用一根探针 和物体之间加上电压。如果探针距离物体表面在纳米级的距离上时，产生隧道效应。电子会 穿过物体与探针之俩的空隙，形成一股微弱的电流。通过一个由压电陶瓷驱动的探针在物体 表面作精确的二维扫描，电流随探针与物体的距离的变化而产生相应的改变。通过测量电流 得到物体表面的形貌，分辨率可以达到纳米级。 1986年原子力显微镜(AbTII)面世．可以对物质表面的温度、硬度、摩擦力、化学力、磁 性、导电性、粘着力、等微结构信息进行测量和分析，它们又被称为继光学显微镜、电子显 微镜后的第三代显微镜。我们用A雕研究了小鼠服中药后神经元细胞的变化．表征出细胞形 貌的变化情况”‘。进行不同的汞(fig)化合物形态与脑神经元细胞作用机理的A刚研究中，我 们考察了安宫牛黄丸对神经元的影响“州“。 近场光学显微镜(NSOM)考察距物体表面一个波长以内的光学现象，基于非辐射场的探 测与成像原理，突破常规光学显微镜所受到的衍射极限，在超高光学分辨率下进行纳米尺度 光学成像与纳米尺度光谱研究。还有扫描电化学显微镜(SECM)、侧力显微镜(IFM)、磁 力显微镜(MFM)、极化力显微镜(SPFM)、摩擦力显微镜、扫描力显微镜及化学力显微镜 等。这类显微镜统称为扫描探针显微镜(SPM)，这类显微镜问世标志着纳米科技时代的开始。 6 另外，细胞观察器可以满足由活细胞成像和数字记录．可以处理多张图片，获得二维至 六维图像。即xyz维、波长维、时问维、局部维。可以将在不同位置、不同时间和多个频道 的图像维自由组合在一起。美国Vanderbilt大学的研究者开发出了一种被称为成像质谱 仪的细胞成像技术，利用该技术可以获得显示组织中不同蛋白质位置的数字图 像，并提高癌症诊断和治疗效果。范德比尔特大学研究人员使用激光和高速计 算机改进了传统的质谱仪，由此研制出的成像质谱仪可获得显示细胞和组织内 蛋白分布的数字照片。新近发展的光学相干层析术(OCT)，被科学家誉为“分子雷达”． 利用光在不同组织中的反射来反映其厚度差异，分辨率可达1个微米级，较cT和核磁共振术 的精密度高出上千倍，能观察生物体内活细胞的动态。 综上所述，单细胞成像观测的研究在技术和应用上得到了较大的发展和拓宽，在此领域中 开展进一步创新性的延