麻竹耐寒转基因体系构建与其耐寒转基因研究.pdfVIP

干旱胁迫下，细胞色素 C 氧化酶作为细胞色素呼吸途径的末端氧化酶，其基因表 达水平严重下调。参与三羧酸循环的关键酶--琥珀酸脱氢酶，其下调变化同样明显。 NADH 脱氢酶与琥珀酸脱氢酶同样作为电子在呼吸电子传递链的进入点，其表达量的变 化程度较为相似。细胞色素 C 还原酶作为线粒体氧化磷酸化系统的中心组成部分，其 表达量下降相对其他复合体基因而言较小，但与非胁迫植株相比，仍有极大变化。在 线粒体呼吸链中，氧化磷酸化过程可产生能量ATP ，生物体内95% 的ATP 来自这种方式。 ATP 合成酶利用呼吸链上复合体 Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ运行产生的质子能，将 ADP 和 Pi 合成 ATP 。 抑制呼吸活性往往会导致细胞内的 ATP 水平下降，也就是ATP 合成酶表达量的下降。 呼吸电子传递链的五个复合体基因中，复合体Ⅳ(cytochrome c oxidase)下调程度 最大。其它四个复合体基因表达量下调程度由大到小依次为：复合体 Ⅱ，复合体 Ⅰ，复合体Ⅲ，复合体Ⅴ。同时，由于胁迫处理的时空特异性以及强度差异，复合体 基因表达量的变化可能存在一定的区别。 麻竹耐寒转基因体系构建及其耐寒转基因研究 杨惠琴 乔桂荣 刘明英 蒋晶 卓仁英(zhuory@) 中国林科院亚热带林业研究所，浙江富阳，311400 中国是世界上竹种资源最丰富的国家，其属种数目远较世界其他国多。因此， 中国竹子研究的进展对世界，尤其对亚洲地区的竹子研究具有很大影响。麻竹是 禾本科（Gramineae ）牡竹属（Dendrocalamus ）多年生木本植物，为典型热性竹 种，对低温敏感。温度条件严重制约了麻竹资源的进一步开发利用。因此利用前 期建立的麻竹花药培养体系，构建麻竹农杆菌介导转基因体系，向麻竹基因组中 导入耐寒基因 CodA，增加麻竹对低温胁迫的耐受能力，扩大麻竹的种植范围， 为麻竹遗传改良提供一条新的途径。 本研究以麻竹花药离体培养获得的胚性愈伤组织为受体，建立了农杆菌介导 的转基因体系。实验表明，将诱导形成的麻竹愈伤组织切成 2-3mm 的小块，预 -1 培养 3 天后用含有 100 mg·L AS 的农杆菌菌液侵染 20min ，接种于含有 100 mg·L-1 AS 的培养基中共培养 3 天，然后在含有 25mg·L-1 Hyg 和 300 mg·L-1 Cef 的筛选培养基上培养，继代抗性愈伤组织直至分化出抗性芽，移至含同样浓度抗 生素的生根培养基上，即可诱导得到抗性转基因再生植株。 以麻竹花药培养获得的愈伤组织为受体，利用上述农杆菌介导转化体系，获 得一批转基因再生植株，经 PCR 检测、Southern 杂交检测证实 CodA 基因已经整 合到麻竹基因组中，为单拷贝插入，RT-PCR 检测结果显示 CodA 基因在低温胁 迫下能够正常表达。低温胁迫后，麻竹转基因植株的电导率和 MDA 含量均低于 非转基因麻竹再生植株，抗氧化酶 SOD、CAT、POD 活性均高于非转基因再生 植株，说明在冻害胁迫下，转耐寒基因麻竹再生植株的耐寒性高于非转基因麻竹 再生植株。 本研究通过农杆菌介导法将Rd29A 诱导型启动子引导的 CodA 基因转入麻竹 花药诱导形成的胚性愈伤组织中，获得含有 CodA 基因的麻竹再生植株。研究结 果对于麻竹乃至其他大型竹种的转基因育种研究，提高麻竹的耐寒性，扩大麻竹 的栽培范围具有重要意义。 关键词：麻竹，农杆菌介导，转基因体系，CodA 基因，耐寒性 楠木总 RNA 提取方法的比较研究 1 2 1 1 1 1 1 庄国庆 ，高继海 ，郭洪英 ，梁颇 ，王泽亮 ，刘青 ，吴斌 1、四川省林业科学研究院，四川成都，610081 ； 2 、四川大学生命科学院，四川成都，610064 摘要 楠木叶片中富含脂类 、多酚和多糖类物质。比较了多种常规裂解试剂 (Tris-SDS、CTAB、异硫氰酸胍和多种Trizol 试剂) 和改良方法对楠木叶片总 RNA