Anaerobiospirillum+succiniciproducens厌氧发酵产琥珀酸培养基优化地研究.pdfVIP

发酵工程学科的进展 一第四次奎圈发酵工翟学术甘论套语文集 Anaerobiospirillums“cc跏Zciprod“cP聆s厌氧发酵 产琥珀酸培养基优化的研究 陈设，詹晓北。，郑志永，王舒，张丽敏，杨 昆 (扛南大学工业生物技术教育部童点实验室，江苏无锅214036) 摘要：呆用PlackeR-Burman设计法对影响AnDerobiospirillumsucciniciproducens产琥珀 畦的11十因素进行了筛选，影响谖菌厌氧发酵产琥珀破的主要培养基成分为瞢萄糖、酵母 抽提物、MgC也．对3十主要影响因素进行了呆用响应面分析．通过对二欢多项回归方程 求解得到最佳水平分别为葡萄糖39．179／L，酵母抽提物14．689／L，MgCq25．769／L，对方 程进行了验证实验，在优化培葬基的条件下琥珀破的产量为22．319／L。比对照组提高了l倍 多． 关键词：Anaerobiospirillumsucciniciproducen#l琉珀醯lPtackett-Burman设计；响应曲面 法(RSM)，BoxoBehnken设计 琥珀酸又称丁二酸，是三羧酸循环(TCA)的中间产物，同时也是厌氧代谢的发酵产 物之一[1]。琥珀酸广泛应用于医药、农药、染料、香料、油漆、食品、塑料等行业，也可以作 为C4平台化合物合成一些重要的化工产品如丁二醇、四氢呋哺、r丁内酯、n一甲基吡咯烷 酮(NMD)、2-吡咯烷酮等D]。另外，琥珀酸还可用来合成可降解的生物聚合物如聚丁烯 琥珀酸酯(PBS)和聚酰胺啪。这使得琥珀酸的市场需求量日益增大。然而，传统的化学 合成法因成本和环境污染等原因限制了琥珀酸的广泛应用。因此，微生物发酵法生产琥 珀酸的研究越来越引起人们的兴趣。 Lee等人研究了培养基各组分对Anaerobiospirillum 产琥珀酸的影响o】，但所采用的优化手段是每次改变一个因素的逐因子实验，这种方法 仅能比较各因素已选定水平的优劣，无法提供未考察区域的信息，不能进行预报和控制。 surface 素”，响应面方法(responsemethodologyRSM)能将实验设计和数学建模综合 起来，通过局部实验回归拟合因素与结果间的全局函数关系，从而得到准确有效的实验 结论r“。 用的培养基成分．，旨在通过响应面法对发酵培养基进行优化，以提高发酵产琥珀酸的产 量，为进一步研究打下基础． 基金项目：本课题为2005年无锝市“学术技术带头^培养工程”资助项目(№200502)． 作者简介：陈设(1981一)，男，江苏海安人。生物化工硕士．*为责任作者． 第四次全国发酵工程学术讨论会 1 材料与方法 1．1实验菌株 产琥珀酸厌氧螺菌(AnaerobiospiHllum 与反应器研究室保存。 1．2培养基殛培养条件 1．2．1培养基 I．0，(NH‘)2SO,1．0，CaCh·2H200．2，MgCl2·6H。O0．2，MgC0310．0·pH7．0。 1．0，(NH．)zSO,5．0，CaCh·2H20 0．2，MgCh·6HzO0．2,MgzC032C．0，pH7．0。 1．2．2培养方法 1．3琥珀酸含量的测定 积与浓度之间的标准曲线，样品在210nm的峰面积带人标准曲线换算得到琥珀酸的含 量。 1．4实验设计 1．4．1Plackett—Burman实验设计 根据厌氧菌生长所需营养要素的一般原则以及微生物发酵影响因素的一般规律，结 合有关该方面的文献报道啪和笔者的前期实验。本实验的实验设计、数据分析及模型建 代码，编码和水平见表l。 上表中自变量编码方程为：面=(五一墨)／△X。，式中z；为自变量的编码值，墨为 白变量的实际实验水平值，x0为实验水平中心点的实际值，△X-为自变量增量。 寰1 P触ett-Burman实验因素水平厦编码 353 陈 设等：A微枷ioJ声i—f“m，州fnici户加dw料j