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染料木黄酮抗瘤机制的研究 页码，1／3 染料木黄酮抗瘤机制的研究 高勇王杰军郭静王革芳许。苛 上海长征医院肿瘤科200003 新生血管形成是实体瘤快速增长所必须的先决条件之一，一方面，新生血管可以为肿瘤细胞 带来丰富的氧气和养料，并将废物带走：另一方面，肿瘤细胞通过新生的血管向远处转移， 因此探讨肿瘤新生血管形成机制已成为日前肿瘤研究领域的义个重要课题。研究表明，血 增殖、迁移和形成血管的两个最主要的斟了。研究表叫，通过药物抑制肿瘤新生血管的形成 可有效控制恶性肿瘤的生长和远处转移。 eIlis 大豆提取物染料木黄酮(g Le¨·)是异黄酮类化合物，它广泛存在于包括大豆在内的多种蔬 菜和水果中，其化学名为4’，5，7三羟基片黄酮。研究表明，体外G刚能抑制人乳腺癌、前列 腺癌、卵巢癌和膀胱癌等多种癌细胞的生长和转移。术文进一步探讨GEN抑制肿瘤新生血管形 成的能力。 材料和方法 配制成上作浓度，使培养渣中DMs0终浓度0．1％。鸡胚由上海市大江养鸡场提供。 养。 2．方法 内培养24k后换成含有定浓度药物的培养液继续培养，每24hI换培养液 液，每孔加DMsO100u1振荡后立即酶标仪检测，检测波长为j70nM。 2．鸡胚尿囊膜(cAM)实验参照№terL“等介绍的方法略加改进，取第七天的 鸡胚，通过光照找到胚义，用手钻轻轻剥去直径为1cIn大小的蛋壳，同时在 鸡胚气室处钻小孔，负压吸引使得剥去蛋壳的地方形成一个人工气室，小 心去除壳膜，暴露CAM。将浸泡过一定浓度VEGF(10ug／Ⅲ1)肃JbFGF(10u g／m1)的滤纸轻轻置于cAM膜上。然后选取一根较粗的静脉，在显微镜下从 静脉内注射L00¨1的药物，分组情况如r：空白剥照组仅含o．1％DMso，用 药组分为G卧1“M、10“M利50¨M=组。每组6个鸡胚。虽后，用伤口膜封 注缺r]，放入恒温箱内培养，培养条件37℃、湿度70％。以上操作均在超净 台内进行。三天后取出鸡胚，去除滤纸。在解剖显微镜下随机选取5个视野 计数滤纸区域内可见血管的分枝点数昌。 I l血管指数= 0 2未处理过的分枝点I 3．western b]。t：培养细胞消化离心后，加入适量的l×蛋白上样液(古) n le：／／E：＼会议资料＼text＼wxh＼0062．htm 染料术黄酮抗瘤机制的研究 10％的分离胶和7％的集层胶(参照《分子克隆实验指导》一书配制)。取 30¨1样揣和琐染的餐白标准品加样，电泳(集层胶内电压60v，分离胶电 压80v)4hr。电泳结束后，穆入电转移槽内，采用硝酸纤维素膜作为印迹 分洗涤后二抗室温孵育30min，TBs洗涤，加入后立刻驭出压片曝光。 4．荧光检测：按前述[]将细胞接种于6孔板之玻璃盖玻片上，药物处理后，生 理盐水轻轻冲洗，按药盒说明滴加荧光显色剂PI和Ann∞ifIv，室温10Ⅱl“l 后，荧光强微镜观察、摄片，经图象处理后计算出荧光显色的阳性细胞比 例。 5．统计分析统计采用sPs7．0统计软件。 2．结果 l对培养的肿痛细胞和内皮细胞细胞毒作用 M 发生凋亡，如图凋亡的电泳改变和annexinV标记的改变。GEN浓度1