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第 25 卷 第 2 期 赣 　南 　医 　学 　院　学 　报 Vol . 25 　No . 2 　 2005 年 4 月 J OU RNAL O F GANNAN M ED ICAL COLL E GE A PR . 2005 实验教学中双向琼脂扩散法的改进 张文平 ,钟有添 ,王小丽 (赣南医学院 病原生物学教研室 ,江西 赣州 　34 1000) μ 摘 　要 : 目的:探讨改进后的双向琼脂扩散试验的可行性 。方法 :在含 0 . 1 g/ ml 的溴酚蓝的凝胶琼脂板上 , 以鸡卵 白蛋白为抗原 ,鸡卵白蛋白免疫血清为抗体进行双向琼脂扩散试验 。结果 : 出现典型的沉淀线且与凝胶背景之间 的反差明显 。结论 :加一定浓度的溴酚蓝可提高双向琼脂扩散试验的敏感性 ;鸡卵白蛋白及其免疫血清既经济又 安全 ,可作为教学实验中双向琼脂扩散试验的实验材料 。 关键词 :双向琼脂扩散法 ;教学实验 ;溴酚蓝 中图分类号 : G642 . 423 　　　文献标识码 :A 　　　文章编号 : 100 1 - 5779 (2005) 02 - 0283 - 02 　　双向琼脂扩散试验是医学微生物与免疫学中的 注射针头挑出孔内琼脂块 。 一种常用血清学试验 。其原理是利用可溶性抗原抗 体在半固体琼脂凝胶内扩散 ,若抗原抗体对应 ,且二 者比例合适 ,在其扩散的某一部分就会出现 白色的 沉淀线[ 1 ] 。由于介质琼脂凝胶在较低浓度凝固时 呈乳白色 ,而抗原 - 抗体复合物的沉淀线也呈 白色 或乳白色 ,二者颜色接近 ,给观察带来一定的困难 ; 附图　凝胶琼脂板 特别是在沉淀线比较弱时 ,难以辨别 。因此 ,本实验 ( ) 1. 4 　加样 　中间孔加鸡卵白蛋白 已知抗原 ,周围 以自制的鸡卵白蛋白及其免疫血清为实验材料 ,并 ( 孔可根据试验需要加抗鸡卵 白蛋 白血清 已知抗 在琼脂凝胶中附加一定浓度的溴酚蓝进行了双向琼 ) ( ) 体 、待检血清 不同浓度的抗鸡卵白蛋白血清 、阴 脂扩散试验 , 以探讨和改进该试验方法的敏感性和 性对照血清 ,于 37 ℃下保温 24～48h ,观察沉淀线 。 可行性 。现将试验结果报告如下 。 2 　结 　果 1 　材料与方法 含有溴酚蓝的凝胶琼脂板呈淡蓝色 ,与抗原 - 1. 1 　鸡卵白蛋白及制备 　无菌条件下取新鲜的鸡 抗体复合物形成的白色沉淀线有较大的反差 ,容易 蛋清 ,2000rp m 离心 10min ,弃上层泡沫 ,4 ℃保存 。 1. 2 　实验动物及免疫血清的制备[ 1 ] 　家兔 10 只 , 观察 ; 即使在沉淀线较微弱的情况下 ,透过光线也能 辨别 。