消渴脂平胶囊对糖尿病大鼠脂肪组织MCP-1影响地研究.pdfVIP

消渴脂平胶囊对糖尿病大鼠脂肪组织 MCP一1影响的研究 ●单国辉 目的：本研究主要观察消渴脂平胶囊对高脂饲料与链脲佐菌素诱导的糖尿病大鼠模型脂肪 组织MCP一1表达水平的影响。 方法：复制糖尿病大鼠模型，分为正常组、模型组、消渴脂平组及马来酸罗格列酮组。灌 胃8周后采用免疫组化技术，从蛋白水平观察各组脂肪组织中MCP一1表达的情况。 蛋白表达情况：正常组脂肪组织MCP一1表达强度较弱、范围小；模型组脂肪组织MCP—l表 达显著增强；马来酸罗格列酮组脂肪组织MCP一1表达较模型组减弱；消渴脂平胶囊组脂肪组 织MCP一1表达较模型组减弱，与马来酸罗格列酮组接近。半定量分析结果显示：正常组局部 弱染，模型组弥漫性染色增强，马来酸罗格列酮局部染色趋强，消渴脂平胶囊组局部弱染，显 著低于模型组。 结论：1、消渴脂平胶囊具有降糖和改善炎症状态的作用。2、糖尿病大鼠脂肪组织中MCP 脂平胶囊可降低糖尿病大鼠脂肪组织中MCP一1蛋白表达。 关键词消渴脂平脂肪组织MCP一1 现代研究表明，T2DM是一种自然免疫和慢性低度炎症性疾病。与临床常见的病毒、细菌 引起的炎症反应不同，它是机体的一种微炎症状态。但其具体作用在哪个靶器官及其作用机 基金项目： 作者简介： 作者单位：长春中医药大学附属医院内分泌科吉林长春130021 发病中起着重要作用。随着社会的发展，糖尿病的病机由阴虚燥热逐渐演变为气阴两虚挟痰 瘀，因此治疗上应以益气养阴、化瘀泻浊为主。 本实验以高脂饲料与链脲佐菌素诱导的糖尿病大鼠模型为实验对象，观察消渴脂平胶囊对 血糖、CRP的影响，并采用免疫组化从蛋白水平观察各组大鼠脂肪组织中MCP一1表达的情 况，以初步探讨T2DM的脂肪组织炎症反应，揭示消渴脂平胶囊在炎症方面的作用，以丰富 T2DM的炎症机制学说，进一步阐释现代消渴“气阴两虚挟痰瘀”病机理论，为中医药防治 T2DM提供新的途径及临床药物，并为深入探讨T2DM的炎症发病机制提供理论及实验依据。 l 实验材料 1．1实验动物 动物中心无特定病原体(specific 获取食物和饮水。 1．2实验药物 (1)消渴脂平胶囊：由山楂、何首乌、黄精、葛根、人参、泽泻、桑叶组成。长春中医药 大学附属医院制剂中心提供。 (2)马来酸罗格列酮片(文迪雅)：葛兰素史克(天津)有限公司提供，批号：国药准字 鼠进行腹腔注射。 占67．5％) 1．4主要仪器 (1)DG一3022A酶联免疫检测仪(国营华东电子管厂)； (2)日立7150型生化自动分析仪(Et本)； 1．5主要试剂 Anti—MCP一1 (1)0Rabbit 北京博奥森生物技术有限公司 福州迈新生物技术开发有限公司 (2)多聚赖氨酸(Poly—L—Lysine) (3)S—P超敏试剂盒(鼠／兔)福州迈新生物技术开发有限公司 (4)DAB显色试剂盒福州迈新生物技术开发有限公司 2 实验内容及方法 2．1实验方法 36只。正常组喂饲普通饲料，高脂组喂饲高脂饲料。4周后参照Srinivasan等‘13和周迎生等‘21 缓冲液。所有大鼠于72h时眼眶取血，分离血清，一20％冰箱冷冻保存备用，待测FPG、 CRP。将造模成功的大鼠随机分为模型组、消渴脂平胶囊组、马来酸罗格列酮组，每组12只， 4m∥kg·d灌胃，正常组及模型组均给予等体积蒸馏水灌胃。给药8周后将大鼠处死取脂肪组 织，进行相关指标的检测。 2．1．2Wistar大鼠DM诊断标准 测定血糖值。以血糖峰值16．7mmol／L诊断为DM。 2．1．3一般状态观察 包括动物精神状态、毛色、死亡等情况。 2．1．4血清FPG、CRP检测 灌胃结束后，大鼠隔夜禁食不禁水12 20分钟后，分离血清，移至一20℃冰箱冷冻保存备。 2．1．5MCP一1蛋白检测 (1)采用免疫组织化学染色法检测MCP—l蛋白表达情况。 野，按脂肪细胞染色区域和染色强度分为0-4分： 0分为无染色或染色极弱； 1分为局部弱染，染色区25％； 2分为局部染色趋强，染色区25％～50％； 3分为弥漫性染色增强，染色区51％～75％； 4分为弥漫性强染色，染色区7