蝎毒多肽干预K562细胞凋亡信号蛋白转导机制地研究.pdfVIP

钙通道阻滞剂异搏定、环胞霉素A 、奎尼丁等与P—糖蛋白作用抑制MDR ，且针对后期 强化及交替应用非交叉耐药方案，以及大剂量放化疗自体骨髓移植治疗和多药耐药基因 导入骨髓细胞中达抗药性移植的研究，以达到防治恶性淋巴瘤耐药复发目的。 在逆转肿瘤细胞多药耐药上，研究证实不少中药( 如汉防己、川芎、浙贝母、茶叶、 雄黄等) 的有效成分具有逆转肿瘤细胞多药耐药的作用［8］。单味中药化学成分清楚， 作用靶点明显，可以说明其逆转机制。如全蝎，本身就有抗肿瘤作用，与其他抗肿瘤药 物联合应用，既可发挥自身的抗肿瘤作用，又可下调凋亡基因的表达，促使耐药细胞凋 亡，从而达到增效抗耐药的效果［9 ］。许多学者更是致力于多靶点、多途径作用的复方 制剂的研究，史哲新等［10］ 的实验研究表明，六神丸可以通过降低P-gP 的表达，提 高Topo Ⅱβ 的表达，同时从酶介导这一途径逆转白血病多药耐药的发生。 中医药在防治肿瘤方面的特色在于整体调节，其作用机理是多部位、多环节和多靶 点的。中药资源丰富，在治疗恶性淋巴瘤方面，无论单用还是联合化疗等其它治疗方面， 均有广泛的临床应用前景和优势。 蝎毒多肽干预 K562 细胞凋亡信号蛋白转导机制的研究 天津中医药大学第一附属医院血液科 6 杨文华 于文俊 郝征 张佳 慢性粒细胞白血病（chronic Myeloid Leukemia，CML）简称“慢粒”，是起源于 多能造血干细胞的恶性增殖性疾病。Ph 染色体自1960年在慢性粒细胞白血病(Chronic myeloid leukemia，CML)中被发现后，成为第一个认识的与恶性 疾病相关的细胞遗传学改变。90%以上的慢粒患者中可发现有Ph 染色体，即t（9；22） （q34；q11），形成 BCR/ABL 融合基因，BCR/ABL 介导的 Ph 染色体畸变被认为是 CML 的始动突变。BCR/ABL 融合基因表达的编码 210 KD 的 BCR/ABL 融合蛋白( p210)具有高 度酪氨酸激酶活性，激活下游 PI3K/Akt 信号通路，并最终影响细胞核内调控凋亡和生 存相关基因的表达，使多种癌基因表达异常,抑制白血病细胞的凋亡。本研究探讨 PESV 对人慢性粒细胞白血病细胞系 K562 细胞凋亡调控的 PI3K、p-Akt 信号蛋白影响及作用 6 作者：杨文华，女，主任医师，教授，博士生导师。工作单位：天津中医药大学第一附属医院血 液科。邮编300193。电话 201 机制。 1 材料与方法 1.1 材料 1.1.1 主要试剂 RPM I 1640、胎牛血清购自Gibco公司；MTT购自Sigma公司；PI3K、 SER473p-Akt、Actin 单克隆抗体(Santa Cruz,USA)、HRP 标记的二抗试剂盒(北京博奥 森生物)。 1.1.2 药物制备：PESV 系将蝎毒粗毒应用分子筛层析技术提纯所得，为分子量 6000 ～ 7000的多肽混合物，纯度为89.1%，使用前用生理盐水溶解稀释到所需浓度。 1.1.3 细胞系 人慢性粒细胞白血病细胞系K562细胞系有中国医学科学院血液学研究 所提供，用含10%FBS的RPMI1640培养液培养;均在37℃、5%CO2、饱和湿度环境孵育。 1.2实验方法和步骤 1.2.1 K562 白血病细胞培养 K562 白血病细胞用 RPMI1640 完全培养液（含 10%新生牛 血清），按常规方法培养。实验时均取对数生长期细胞。 1.2.2 MTT比色法实验 取对数生长期细胞以1×105/ml 浓度接种于96孔培养板，每孔 80μl,分别加入 PESV 10µg/ml、15µg/ml、20µg/ml、40µg/ml、环磷酰胺 10mg/ml 和生 理盐水各 20µl，每组设 3 个平行复孔，同时设空白对照组调零。培养 24 h、48、72 h 后计算各时间点 IC50 值。根据 MTT 试验结果，选择 72h IC50 药物浓度（20µg/ml）进 行后续试验。 5 取对数生长期细胞以1×10 /ml 浓度