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第八届全翻分析截生物学学术研讨套一论文及综述摘要
7质谱分析检测a—l，2甘露糖苷酶异源表达的活性
詹洁熊凌霜昊军
(军事医学科学院生物工程研究所 北京 100071)
【摘要】a一1，2甘露糖苷酶存在于多种真核生物细胞，其功能是剪切糖蛋白聚糖链上
特定键位的甘露糖苷，生成核心糖苷链。核心糖苷链结构是进～步形成杂合型及至复杂
型糖链的基础。
毕赤酵母是外源基因表达的重要宿主，可用于获取满足需求量的重组蛋白。然而其
表达产物做携带链为多聚甘露糖型，与哺乳动物细胞翻译后加工糖链在大小、成份等方
面有较大的差异。本研究通过将绿色木酶来源的Q--1，2甘露糖菅酶引入毕赤酵母宿主，
以期削减酵母细胞表达的外源糖蛋白N糖链甘露糖数目，续之逐步改造毕赤酵母工程菌
宿主糖基化模式。
切下由Q～交配因子前导肽序列基因、rods序列及内质网定位序列基因的片段连入酵母
B是含有166个氨基酸的糖蛋白，第80位Asn为仅有的一个N糖基化位点。将连接了
一13及MnsI和IFN—B共表达的重组质粒。将两种重组质粒各自转化毕赤酵母宿主
GSll5。培养诱导两种酵母工程菌转化子菌株，收集培养上清进行报告蛋白表达检测，
VSV—Wish细胞测活及SDS—PAGE均显示两种转化菌株有hIFN—t3产物。
切取报告蛋白llIFN—B的凝胶条带，经缓冲液析出、去除SDS、真空浓缩等步骤，用
甘露糖苷酶共表达的hIFN～13的质谱分析图中该分子量蛋白峰大大减少，偏至约2-3×
104的区域出现若干小峰。推测报告蛋白分子量的变化是由于甘露糖残基数目改变，表
明绿色木酶Q--1，2甘露糖苷酶在酵母宿主细胞中有活性显示。分析图谱在约2．4×104
区域也出现峰，这一现象可能可以解释为糖链被切掉后，宿主细胞产生部分代谢补偿效
应。
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