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广西师范大学学报(自然科学版)
2003年10月 JOURNA!，0FGUANGXINORMALUNIVERSITY
螺旋型微流控PCR芯片连续自动扩增长
片段基因的研究
刘金华，殷学锋’，方肇伦
(浙江大学化学系敲分析系统研究所．浙江杭州3i0027)
连续流动微流控PCR芯片已成功地实现了快速PCR扩增””。，但限于lkb以内的短基因片段．本文
用标准光刻和蚀刻技术”研制了一种由内向外流动的螺旋型微流控PCR玻璃芯片，通道深65
p．m，宽190
分散和阻力；首次在26min内成功地扩增了6012 A-DNA．
bp
nI√s．用内径为75p．m，外径375
最小进样速度25 p．m的毛细管置于内径为0．5Film的聚四氟乙烯管中，
并在两端用粘接剂将毛细管和聚四氟乙烯管中间的环状部分封堵．用外面的聚四氟乙烯管连接注射泵、六
通阀和PCR芯片，而溶液和样品在内管(毛细管)中流动，使sI相应的死体积从14pI。缩小到0．30p．1。，大
大减少了分散，降低了样品和试剂的消耗，控制了污染．通过微机用VB语言自编软件控制注射泵的进样
速度和阀位，从而实现了用sI进行芯片通道化学改性、PCR扩增和洗涤微通道的连续自动操作．
012 aDNA
用40pI．PCRbuffer作为间隔溶液，将lOjzI，500bp，10”I。6bp PCR反应液和负空白
2100
连续通过螺旋型微流控PCR玻璃芯片，在芯片出口处接取扩增产物后，用Agilem
验．结果说明无交叉污染(图2)，该扩增装置每小时可连续扩增500bp^DNA7个．
j mH
St-hematieofc。ntllnlo时P(R SP
Fig diagram ro【hipampli{{caIionsystemsyringepump：V．2way、_alve．V
selectoryake，HC r}flock{ordtmatu zonesonthe
holdingcoll：I·Ⅱ·Ⅲcoppe ration．annealing，extensionchip
基金项目：国家自然科学基金重大资助项日
作者简介：殷学锋(19d5)，男，教授．博士生导师研究方向：微流控分析E hzz】cn
mail：cheymxf@mail
广西师范大学学报(自然科学版) 第21卷
§40
；30
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Z0
25 35 45 55 6s 7s e5 ，5
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