多重耐药泵抑制剂提高肠球菌对氟喹诺酮药物敏感性地研究.pdfVIP

艟煎蹙差盔金塞煎 全垦熊叠盛鎏：堡丞塞塑：塑造塞堑绳 多重耐药泵抑制剂提高肠球菌对氟喹诺酮药物敏感性的研究 天津医科大学第二医院感染性疾病研究所(300211) 王玉宝宋诗铎魏殿军祁伟 肠球菌属于革兰阳性球菌，是重要的条件致病菌和院内感染的常见病原菌。氟喹诺酮类抗菌药物 在临床被广泛使用，但耐药现象日益严重。细菌对氟喹诺酮耐药包括靶位突变和主动泵出这两种机制。 我们的研究旨在探讨包括敏感株和耐药株在内的临床分离肠球菌是否存在对氟喹诺酮的主动泵出机 制，为克服肠球菌耐药提供新的途径。 菌株来源：29株临床分离肠球菌采集自天津市8家三级甲等医院(天津医科大学总医院、天津医科 大学第二医院、天津医科大学第一中心医院、天津医科大学第二中心医院、天津医科大学第三中心医院、 天津医科大学第四中心医院、天津医科大学肿瘤医院、天津市胸科医院)，包括粪肠球菌25株、屎肠球菌 1株、酪黄肠球菌1株、鸟肠球菌1株、母鸡肠球菌1株。标准菌株粪肠球菌ATCC29212购自中国药品生 物制品检定所。 实验药物和培养基：诺氟沙星、环丙沙星、氧氟沙星以及删琼脂购自中国药品生物制品检定所。 利血平购自上海医科大学红旗制药厂。 菌种鉴定：采用Vitek．AMS自动微生物分析仪(法国Bio．Merieu公司)。 药物敏感实验：采用琼脂二倍稀释法，多点接种仪定量种菌，ATCC29212做为质控。按美国临床实 验室标准化委员会(NcclS)的标准进行操作和判读结果。抗菌药物终浓度系列为512一o．25 mg／L，利 血平终浓度为20 ms／L。 结果表明，培养基只加入利血平(终浓度20 ms／L)而不加入抗菌药物时，所有实验菌株的生长没有 出现抑制现象。加入利血平前、后，诺氟沙星、环丙沙星和氧氟沙星对25株粪肠球菌MIC的变化及下降 倍数分别见表1，2。加入利血平前、后，诺氟沙星、环丙沙星和氧氟沙星对屎肠球菌、酪黄肠球菌、鸟肠 球菌、母鸡肠球菌MIC的变化见表3。 讨论能够主动外排抗菌药物导致细菌对氟喹诺酮耐药的转运子属于多重耐药泵，其底物还包括 溴化乙锭、吖啶黄、若丹明等，因此被称为氟喹诺酮．多重耐药泵，例如金黄色葡萄球菌的NorA蛋白。 裹1加入利血平前、后3种氟喹诺酮对25株粪肠球菌M1C的变化 一72— 全国照苎蹙盎：堡亟塞塑：迦迨塞堑绳 照叠蹙鎏盘金塞速 表3加人利血平前、后3种氟喹诺酮对4株肠球菌MIC的变化 利血平是一种多重耐药泵抑制剂，能否增加细菌对氟喹诺酮的敏感性，可以用来判断革兰阳性球菌 是否存在对氟喹诺酮的主动泵出机制。本组研究发现，利血平能使所有被检测的肠球菌对诺氟沙星的 敏感性增加，使大部分肠球菌对环丙沙星的敏感性增加，说明诺氟沙星、环丙沙星的主动泵出机制普遍 存在于临床分离的粪肠球菌。主动泵出诺氟沙星、环丙沙星，在屎肠球菌、鸟肠球菌、母鸡肠球菌、酪黄 肠球菌等其它肠球菌中可能也是普遍现象，但还需要扩大研究例数。 肠球菌能够主动泵出诺氟沙星最早由Lynch等描述，他们证实了4株粪肠球菌野型株和1株屎肠 球菌野型株能够主动泵出诺氟沙星、氯霉素，其中部分菌株能泵出四环素。Jonas等在1株粪肠球菌野 型株中确定了一个编码多重耐药泵的基因，命名为EmeA(肠球菌多重耐药外排基因)。EmeA基因有 1 140 A与金黄色葡萄 A有380个氨基酸，含有12个跨膜区域和一个信号肽。Eme bp，编码的蛋白Eme 球菌Nor A的相似性为32％，能够依赖能量泵出溴化乙锭、诺氟沙星等结构无关的化合物，而且多重耐 药泵抑制剂如利血平、维拉帕米、兰索拉唑能够抑制其功能。剔除此菌株的FaneA基因或使用利血平 等都能够使细菌对诺氟沙星、环丙沙星、克林霉素、红霉素、新生霉素等药物的MIC下降2倍。