稳定表达人TSH+β新剪接变体蛋白CHO细胞系的建立.pdfVIP

袭1各组仔代大鼠小脑Pep-2与MBPmRNA及蛋白测量结果(i±5，n=5) 注：与NI组比较。．P0．05，．-p0．Ol 无显著差异。 3讨论 胚胎期和成年期并不受甲状腺激素的影响，而在出 在脑发育过程中，神经元与胶质细胞都是甲状 生后的第2、3周才会受甲状腺激素刺激而表达，如 腺激素(TH)作用的靶细胞，从孕晚期到出生后几个果此时缺乏甲状腺激素。就会导致蒲肯野细胞树突 月内是少突胶质细胞分化和髓鞘形成的重要时期。 不可逆的减少。在本实验中，SID组Pcp一2的mRNA 本实验中仔鼠14和28日龄正好处于该时期内。在水平和蛋白水平均明显低于NI组，说明严重碘缺 本实验中。虽然MBPmRNA水平各组间没有统计乏影响了蒲肯野细胞的发育，而MiID组和Exl组 学上的差异。但随碘供给量的增加呈增加的趋势， 与NI组比较仅有轻度降低的趋势。通过本研究说 蛋白表达SID组明显弱于NI组。说明严重碘缺乏明：严重碘缺乏时，影响了仔鼠的小脑髓鞘和神经 影响了髓鞘的发育。这与以往的研究相一致。而 元(主要是指蒲肯野细胞)发育障碍，而轻度碘缺乏 MilD组和Exl组与NI组无明显差异。考虑为母鼠和碘过量时，由于机体的代偿作用，仔鼠的发育障 乳腺和仔鼠自身代偿的结果。Pcp一2参与了蒲肯野碍有所减轻，虽然神经元(主要是指蒲肯野细胞)发 细胞形成的过程。是蒲肯野细胞最具特异性的标 育不如正常组，但程度较轻。 稳定表达人TSH 13新剪接变体蛋白CHO细胞系的建立 刘春蓉1李兰英z应凡2 (1．武警医学院附属医院病理科。天津300162；2．天津医科大学代谢病医院内分泌研究所，天津300070) 也存在与小鼠类似的鸭HB新剪接变体mRNA表 促甲状腺激素(thyrotropin，TSH)已成为目前下 丘脑一垂体一甲状腺一免疫网络的研究热点。，IsH由 达。迄今有关人，IsHB新剪接变体的研究仅限于其 Ct亚基和B亚基通过非共价键连接组成，鸭H母决在体内的mRNA表达分布研究，尚无有关其生物学 功能的研究，本研究拟建立能稳定表达TSH?新剪 定了TSH的激素特异性。2009年Vincent等在小鼠 骨髓细胞中检测到第一个功能性TsHB新剪接变体接变体蛋白的CHO细胞系．为其生物学功能的研 且证实其在甲状腺与外周皿白细胞中表达而天然 究提供物质基础。 型TSHa在甲状腺和外周血白细胞中未检出。提示1材料与方法 TSHB新剪接变体可能具有不同于天然型TSHl3的 TSHb剪接变体重组表达载体，将其转染入CHO细 独特生物学作用。同年Jeremy等报道人类甲状腺中 生国堡直痘堂盘盍2Q!!生!Q旦2Q旦筮3Q鲞￡h也』星趟￡叵照，堂Qb笪2Q，2Q!!。y丛≥Q ·69· 胞系．有限稀释法和抗生素加压筛选获得高效表达 TSHl3新剪接变体mRNA表达。Westernblot方法分 目的蛋白的阳性克隆，扩大培养后建立稳定表达人 别从建立的CHO稳定表达细胞及其上清中检测到 TSHb新剪接变体的CHO细胞系，RT—PCR鉴定目的蛋白表达。分子量约为8×103。具有良好抗原 blot方法鉴 TSHl3新剪接变体mRNA表达，Western性。激光共聚焦显微镜下观察到GFP(绿色)和 定TSH[3新剪接变体抗原性，免疫荧光染色后激光 共聚焦显微镜下观察人髑Hb新剪接变体阳性表达 细胞。阳性率约99％。 CHO细胞系。 3讨论 2结果 本研究成功建立了能稳定表达人TSHl3新剪接 从人外周血白细胞中获得的TSHl3新剪接变体变体蛋白CHO细胞系，通过纯化可获得人TSHl3新 全编码区基因序列经测序完全正确。RT—PCR方法剪接变体真核表达蛋白，将为TSHl3新剪接变体功能 从建立的CH